交互積層法を用いた機能的血管化肝組織の構築

逐层法构建功能性血管化肝组织

基本信息

批准号：
17K16506
负责人：
佐々木一樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-01 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17K16506/
关键词：
血管化三次元肝組織交互積層法初代肝細胞臓器再生

项目摘要

平成29年度は、ヒトiPS由来肝細胞やヒト初代肝細胞を用いて血管化三次元肝組織の構築に取り組んだ。ヒトiPS由来肝細胞を用いた検討においては、交互積層による細胞コートを施すため、シート状に分化誘導されたヒトiPS由来肝細胞を、アクターゼを用いて単一細胞に分離した。その後、交互積層法を用いて、血管化三次元肝組織の構築は可能であったが、アルブミン産生能は、単一細胞にした時点で、劇的に低下することが分かった。したがって、肝細胞の機能を維持するには、培養容器からの単一細胞の調整・回収方法の検討、または、シート状のまま積層体を構築するなどの工夫が必要と考えられた。初代肝細胞を用いた検討においては、肝細胞の分離法について検討した。まず、予備検討として、ラット肝からのコラゲナーゼ処理により肝細胞分離を試みた。次に、ヒト初代肝細胞については、倫理委員会の承認に基づき、ヒト切除肝から肝組織片を採取し、コラゲナーゼ処理によりヒト肝細胞を分離した。分離されたヒト肝細胞に対し、交互積層法による細胞コート法を施し、ヒト線維芽細胞、血管内皮細胞を用いて、血管化三次元肝組織の構築は可能であった。機能面では、アルブミン産生は確認されたが、時間経過で著しく低下することが分かった。今後、肝障害モデル動物に対する組織片による治療効果等の実験に進む際には、肝細胞の機能を維持するべく、組織構築から移植までのタイミングや、移植部位（皮膚や肝表面）などの検討が必要と考えられた。

2017财年，我们致力于使用人iPS衍生肝细胞和人原代肝细胞构建血管化三维肝组织。在使用人iPS来源的肝细胞的研究中，诱导分化为片层的人iPS来源的肝细胞使用actase分离成单细胞，以便通过交替分层包被细胞。随后，利用逐层堆叠的方法可以构建血管化的三维肝组织，但发现一旦细胞减少为单细胞，白蛋白生产能力就会急剧下降。因此，为了维持肝细胞的功能，有必要考虑从培养容器中制备和收集单细胞的方法，或者在仍为片状的情况下构建层压体的方法。在使用原代肝细胞的研究中，研究了分离肝细胞的方法。首先，作为初步研究，我们尝试通过胶原酶处理从大鼠肝脏中分离肝细胞。接下来，关于人原代肝细胞，根据伦理委员会的批准，从切除的人肝脏中收集肝组织碎片，并通过胶原酶处理分离人肝细胞。通过对分离的人肝细胞采用细胞涂层方法，采用逐层堆叠的方法，可以利用人成纤维细胞和血管内皮细胞构建血管化的三维肝组织。就功能而言，白蛋白的产生得到了证实，但发现它随着时间的推移而显着减少。今后在进行组织碎片对肝损伤模型动物的治疗作用等实验时，我们会考虑从组织构建到移植的时间以及移植部位（皮肤或肝表面），以维持肝细胞功能。被认为是必要的。