癌への特異的標的化を可能とするアデノウイルスベクターシステムの開発

开发能够特异性靶向癌症的腺病毒载体系统

基本信息

批准号：
13218142
负责人：
水口裕之
金额：
$ 25.98万
依托单位：
National Institute of Health Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

組織特異性を有したアデノウイルスベクターの開発には、nativeのアデノウイルスの受容体であるCAR(coxsackievirus-adenovirus receptor :第1の受容体)やαvインテグリン(第2の受容体)、ヘパラン硫酸(第3の受容体)を認識せず、ファイバーノブのHIループやC末端コード領域などに挿入した外来ペプチドを介して細胞特異的受容体を認識してのみ感染するベクターシステムの開発が必要である。本年度は、昨年度までに基本ユニットを開発済みのファイバーノブのFGループとペントンベース、ファイバーシャフトの3領域を同時に改変することで、上記の3つの受容体とは結合しないトリプルミュータントアデノウイルスベクターの改良を行った。CARとの結合能を除去するためのファイバーノブの変異として、FGループに変異(アミノ酸欠損)をもったベクター(昨年度に開発済み)に加え、ABループに変異(アミノ酸変異)を有したトリプルミュータントアデノウイルスベクター(ペントンベースのRGDモチーフの欠損、およびファイバーシャフト領域を35型アデノウイルス由来に置換)を作製した。これらのベクターの遺伝子導入・発現特性を検討したところ、ABループに変異を加えたベクターでは更なる遺伝子発現能の減弱が認められ、in vitroとin vivo(マウス)の両条件化でmock群に近いレベルの活性しか認められなかった。従って、特定の臓器で目的遺伝子の発現を起こさないアデノウイルスベクターの更なる改良に成功し、ターゲティングアデノウイルスベクターのための基盤ベクターになりうるものと期待された。

具有组织特异性的腺病毒载体的开发需要开发不识别天然腺病毒受体（CAR），αV整合蛋白（第二受体）和硫酸乙酰肝素（第三受体）的媒介系统，并且只能通过插入fiber knob或c terminal of fiber of fiber op的硫酸盐（第三受体）来感染细胞特异性受体。今年，我们通过同时修改纤维旋钮的FG环，Penton碱基和纤维旋钮的纤维轴，与上面提到的三个受体没有结合的三重突变腺病毒载体进行了改进，该载体与上面提到的三个受体结合。作为纤维旋钮中的突变，可以消除其与汽车结合的能力，在FG环（去年开发）中具有突变（氨基酸缺乏）的载体，以及具有AB回路中具有突变（氨基酸突变）的三重突变腺病毒载体（在基于Penton的RGD基序中的RGD基序中有缺陷的RGD基序，均与Fiber a频率区域替换为355。当检查了这些载体的基因转移和表达特征时，AB环中具有突变的向量显示出基因表达电位的进一步衰减，并且只有活性与体外和体内（小鼠）下模拟组的活性相似。因此，可以预期，对不引起特定器官中靶基因表达的腺病毒载体的进一步改进可能会成功，并且可能成为靶向腺病毒载体的基础载体。

项目成果

期刊论文数量（51）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Okada Y., Okada N., Mizuguchi H., Hayakawa T., Mayumi T., Mizuno N.: "An investigation of adverse effects caused by the injection of high-dose TNFα-expressing adenovirus vector into established murine melanoma"Gene Ther.. (印刷中). (2003)

Okada Y.、Okada N.、Mizuguchi H.、Hayakawa T.、Mayumi T.、Mizuno N.：“对已建立的小鼠黑色素瘤注射高剂量 TNFα 表达腺病毒载体引起的不良反应的调查”Gene Ther ..（正在出版）（2003）。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

H. Mizuguchi, N.Koizumi, T.Hosono, N. Utoguchi, Y.Watanabe, M.A.Kay, T.Hayakawa.: "A simplified system for constructing recombinant adenoviral vectors containing heterologous peptides in the HI loop of their fiber knob"Gene Ther.. 8. 730-735 (2001)

H. Mizuguchi、N.Koizumi、T.Hosono、N. Utoguchi、Y.Watanabe、M.A.Kay、T.Hayakawa.：“用于构建重组腺病毒载体的简化系统，其纤维旋钮的 HI 环中含有异源肽”基因

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Augmentation of the migratory ability of DC-based vaccine into regionalymph nodes by efficient CCR7 gene transduction.

通过有效的 CCR7 基因转导增强 DC 疫苗迁移至区域淋巴结的能力。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Gene Ther. 12
影响因子：
0
作者：
Okada;N.;et al.
通讯作者：
et al.

N.Koizumi, H.Mizuguchi, T.Hosono, A.Ishii-Watabe, E.Uchida, N.Utoguchi, Y.Watanabe, T.Hayakawa.: "Efficient gene transfer by fiber-mutant adenoviral vectors containing RGD peptide"Biochim.Biophys.Acta. 1568. 13-20 (2001)

N.Koizumi、H.Mizuguchi、T.Hosono、A.Ishii-Watabe、E.Uchida、N.Utoguchi、Y.Watanabe、T.Hayakawa.：“通过含有 RGD 肽的纤维突变腺病毒载体进行高效基因转移”Biochim

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Koizumi N., Mizuguchi H., Sakurai F., Yamaguchi T., Watanabe Y., Hayakawa T.: "Reduction of natural adenovirus tropism to mouse liver by fiber-shaft exchange in combination with both CAR- and αv integrin-binding ablation."J.Virol.. 77. 13062-13072 (2003)

Koizumi N.、Mizuguchi H.、Sakurai F.、Yamaguchi T.、Watanabe Y.、Hayakawa T.：“通过纤维轴交换结合 CAR 和 αv 整合素结合消融，减少天然腺病毒对小鼠肝脏的趋向性.”J.Virol.. 77. 13062-13072 (2003)