腫瘍の特異的標的化を目指した遺伝子治療法の開発

开发针对特定肿瘤靶向的基因治疗方法

基本信息

批准号：
12217123
负责人：
濱田洋文
金额：
$ 60.67万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

腫瘍に対する選択的標的化の候補分子を探索するために、抗体のFcドメインに結合するProtein AのZ33モチーフをAd5ファイバーのHIループに持つAdv-FZ33アデノウイルスを作成した。CARをほとんど発現しないヒト膵癌細胞AsPc1やヒトメラノーマ細胞A375に対する遺伝子導入効率をEGFPないしb-gal遺伝子発現で測定した。AsPc1やA375に発現する表面分子(CD29、CD54など)に対する抗体を付着させたAdv-FZ33による遺伝子導入・遺伝子発現は、コントロール(抗体の非存在下またはコントロールIgG併用でのAdv-FZ33、ならびに野生型Ad5ファイバーAdv-Fwtのウイルス)による遺伝子導入・発現の数十倍に増強できた。また、ErbB2を高発現するヒト卵巣癌細胞(SK-OV3など)への遺伝子導入は、ErbB2抗体の併用により、選択的に著明に(EGFP遺伝子導入細胞%で、5%から90%へ)増強できた。腫瘍細胞とZ33アデノウイルスとを架橋することによって遺伝子導入効率が高まるモノクローナル抗体をスクリーニングすることにより、腫瘍細胞に対して標的化の可能な表面分子と抗体の組み合わせの探索を開始している。先行しているヒト膵癌を標的化できる新規抗体作製のプロジェクトでは、すでに4種類の抗体産生ハイブリドーマが樹立されている。このうちの一つクローンA^*によって得られるモノクローナル抗体は、AdvFZ33アデノウイルスの膵癌細胞AsPc1への遺伝子導入効率を、非常に強く(200倍)増強し、有望である。

为了寻找选择性肿瘤靶向的候选分子，我们创建了一种 Adv-FZ33 腺病毒，其在 Ad5 纤维的 HI 环中具有 Protein A 的 Z33 基序，该基序与抗体的 Fc 结构域结合。通过EGFP或b-gal基因表达测量基因转移至几乎不表达CAR的人胰腺癌细胞AsPc1和人黑色素瘤细胞A375中的效率。使用附有抗 AsPc1 和 A375 上表达的表面分子（CD29、CD54 等）的抗体的 Adv-FZ33 进行基因转移和基因表达，使用对照（不存在抗体或与对照 IgG 组合的 Adv-FZ33）和野生使用 Ad5 纤维 Adv-Fwt 病毒，我们能够将基因转移和表达增强数十倍。此外，通过与ErbB2抗体的组合，可选择性且显着地将基因转移至高表达ErbB2的人卵巢癌细胞（例如SK-OV3）中（EGFP基因转染细胞的百分比为5%至90%）。能够强化它。通过筛选通过交联肿瘤细胞和Z33腺病毒来提高基因转移效率的单克隆抗体，我们已经开始寻找能够靶向肿瘤细胞的表面分子和抗体的组合。在一个正在进行的创建能够靶向人类胰腺癌的新抗体的项目中，已经建立了四种类型的产生抗体的杂交瘤。从其中之一克隆 A^* 获得的单克隆抗体很有前景，因为它非常强烈（200 倍）增强 AdvFZ33 腺病毒向胰腺癌细胞 AsPc1 中的基因转移效率。