HGF導入骨髄由来間葉系幹細胞を用いた肺組織障害に対する新規治療法の開発

利用 HGF 转导的骨髓间充质干细胞开发治疗肺组织损伤的新方法

• 批准号: 17790520
• 负责人: 兼平 雅彦
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790520/
• 关键词: 遺伝子治療; 細胞治療; 肺線維症; 肝細胞増殖因子; 間葉系幹細胞; プレオマイシン肺障害; ファイバー改変アデノウイルス; 組織修復; 骨髄由来間葉系幹細胞; 肝細胞増殖因子(HGF); ブレオマイシン; アデノウイルスベクター; マウス肺障害モデル; 再生医療

背景ならびに目的)肺線維症は現在、有効な治療法がなく、発症機序にも不明な点が多い難治性疾患として知られている。これまでに肺線維症マウスモデルとして汎用されているブレオマイシン肺障害において、肝細胞増殖因子(HGF)が症状を緩解したという報告があり、また、骨髄由来間葉系幹細胞(MSCs)が傷害を受けた肺組織へ遊走し、組織の修復に寄与するという報告もなされている。そこで研究代表者(兼平)は、ブレオマイシン肺障害を誘導したマウスへHGF強制発現MSCs(HGF-MSCs)を接種することで、より効率的な治療効果が得られるものと考え、実験を行ってきた。研究業績の概要)MSCsはアデノウイルス感染に必須のレセプターであるCARの発現が低いため、MSCsへのHGF遺伝子導入は、ファイバー改変アデノウイルスペクターを新たに調整して行った。MSCsにはHGF遺伝子が効率よく導入されること、HGFタンパク質を発現すること、ならびに産生されたHGFタンパク質は生理活性を有することを確認した。次にMSCs単独で最も効率よくブレオマイシン肺陣害の症状を緩解する条件を検討した。従来の論文がブレオマイシンを腹腔内注射しているのに対し、特殊な機器を用いて経気道的にブレオマイシンを均一に肺へ投与する実験系を確立した。またAshcroft scoreによりマウス各個体の症状を客観的に評価する方法を用いた。ブレオマイシン投与1日後に3日連続で5x10^5cells尾静脈より接種し、12日後に肺を回収、染色したところ、未処理群に比べ、顕著な症状の緩解効果ならびに気管支肺胞洗浄液(BALF)中の炎症細胞数の減少を認めた。HGF-MSCs接種による更なる症状の緩解を組織像、BALF中の炎症細胞数、炎症性サイトカイン濃度ならびに肺組織へのヒドロキシプロリン滲出量などの観点から現在確認している。

背景和客观）肺纤维化目前被称为难治性疾病，没有有效的治疗和许多未知的发育机制。迄今为止，有报道称，肝细胞生长因子（HGF）在博霉素肺部疾病中的症状缓解，这些症状已被广泛用作肺纤维化的小鼠模型，并且骨髓骨髓衍生的间质干细胞（MSC）迁移到受伤的肺组织，从而导致组织修复。因此，主要研究者（Kanehira）进行了一个实验，认为通过接种诱导以表达强制的HGF（HGF-MSC）诱导博来霉素肺损伤的小鼠，可以实现更有效的治疗效果。研究成就：由于MSC的CAR表达较低，这是腺病毒感染必不可少的受体，因此通过新调节纤维改造的腺病毒Pector进行HGF基因转移到MSC中。已确认HGF基因有效地转移到MSC中，表达HGF蛋白，并且产生的HGF蛋白具有生理活性。接下来，我们最有效地研究了仅使用MSC来缓解博来霉素肺损伤的条件。在传统的论文中，博霉素被注入腹膜内，建立了一个实验系统，其中博来霉素使用特殊设备均匀地施用到跨气道的肺部。此外，使用Ashcroft评分来客观地评估每个小鼠个体的症状。在给药后一天，连续三天接种5x10^5cells尾静脉，并在12天后收集并染色肺，并与未经治疗的组相比，症状的显着缓解，bronchoalchoalveallacol扫描液中的炎症细胞数量减少（BALF）。目前正在从组织学的角度，BALF中的炎症细胞的数量，炎性细胞因子的浓度以及羟基丙烯渗出量从组织学的角度来确认由于HGF-MSC接种引起的进一步症状的缓解。