脊椎動物の肺の獲得プロセスに関する進化発生学的研究

脊椎动物肺部获得过程的进化和胚胎学研究

基本信息

批准号：
20017024
负责人：
岡部正隆
金额：
$ 5.89万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

ポリプテルスの咽頭嚢形成期の遺伝子発現パターンの解析を行った。方法は、whole mount in situ hybridization法を用いて各Tbx遺伝子群、Fgf遺伝子群の発現パターンを可視化することと、胚発生期における詳細な咽頭嚢の形成過程を明らかにする目的で、発生ステージ毎に胚のパラフィン連続切片を作製し、ヘマトキシリン・エオシン染色を行い、組織の形成過程を観察し、先の遺伝子の発現パターンを組織レベルで明らかにした。さらに、ポリプテルスのゲノムBACライブラリーの構築と咽頭胚のEST解析を行った。支援班と協力してポリプテルスのゲノムライブラリーの作成を試みた。雄のポリプテルス成体から有核赤血球を採取にこれからゲノムDNAを抽出し、BACライブラリーの構築を行った。原因が特定できていないが、数回の試みを行ってもライブラリー構築に都合のよいサイズのゲノム断片を得ることができず、現在のところBACライブラリーの完成には至っておらず、現在も構築を試みている。一方でフィスミドを用いたゲノムライブラリーの構築には成功している。一方、ポリプテルスの神経胚以降孵化直後までの胚を用いてEST解析を行った。約5万のクローンのシーケンシングを両方向から行い約10万リードのシークエンスを得た。クラスター解析の結果、約1万3000遺伝子のシークエンスを得たと推測される。現在ホモロジー検索を行い、各種遺伝子ファミリー毎に得られた遺伝子を整理し、遺伝子情報公開の準備をしている。

分析了咽囊形成阶段息肉的基因表达模式。该方法使用整个安装固定的原位杂交来可视化每个TBX和FGF基因组的表达模式，并阐明在胚胎发生时详细的咽囊形成过程，在每个发育阶段，在每个发育阶段制备了胚胎的串行石蜡切片，在每个发育阶段，苏木基蛋白染色的过程都表达了甲氧基蛋白染色，并表达了该过程，并表达了该过程，并表达了该过程，并且是对胚胎的表达，并且是对胚胎的表达构成的，并且该过程是构造的，并且是对胚胎的表达进行了构造的，并且该过程是构造的，并且是构成的，并且是在胚胎染色的。等级。此外，我们进行了息肉的基因组BAC库和咽胚的分析。我们试图与支持团队合作，创建一个基因组库。从雄性息肉成年人中收集了成核的红细胞，并提取基因组DNA并构建了BAC文库。原因尚未确定，但是经过几次尝试，我们无法获得一个方便构建图书馆的大小的基因组片段，目前尚未完成BAC库，我们仍在尝试构建它。另一方面，已经成功地构建了使用Fismid的基因组库。另一方面，在孵化后立即使用来自息肉神经蛋白酶的胚胎到立即进行EST分析。从两个方向上测序了大约50,000个克隆，以获得约100,000个读取的序列。聚类分析表明，获得了约13,000个基因的序列。当前，正在进行同源性搜索，为每个基因家族提供了基因，并为披露基因信息做准备。