人工核酸によるRNAの検出と精製

使用人工核酸检测和纯化 RNA

基本信息

批准号：
19021034
负责人：
大槻高史
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19021034/
关键词：
人工核酸 PNA miRNA noncoding RNA アレイ RNA精製ペプチド核酸

项目摘要

人工核酸の一種であるペプチド核酸(PNA)は、ペプチド骨格に核酸塩基が付いた構造をもつ。PNAの特徴の一つは、相補的なRNAと非常に強く結合することであり、同じ配列のDNAやRNAと比べても格段にRNA結合能が高く、また配列特異性も優れている。本研究では、この特性を生かして、以下の2つの研究を行った。1) 近年miRNAと呼ばれる小さなRNAが多数存在し、広範な生命機能を制御していることが明らかになり、様々な状態における生体内のmiRNA発現量を調べることが生命科学研究における重要課題となってきた。本研究課題では、PNAがRNAに特異的に強く結合する特性を生かし、miRNAを高感度に検出するためのPNAアレイの開発を行った。様々な状態の細胞、特に様々な疾患におけるmiRNAの発現量を網羅的に調べることは、現在急務になっている。そのため疾患に関係するmiRNAなどを題材としてPNAアレイの能力を検証した。10merのPNAプローブを用いたところ, miRNAの検出によく用いられるDNAプローブ(10merおよび20mer)と比べ, 非常に感度の良い検出が可能になった。2) RNA混合物の中から単一のRNA種を精製する方法として、PNAを固相担体とする簡便なRNA精製法の開発に取り組んだ。固定化PNA法が、低温で高効率にRNAを単離でき、多くのRNAに拡張できる方法であることを示した。

肽核酸（PNA）是一种人造核酸，具有一种结构，其中肽骨架具有核酸碱。 PNA的特征之一是与互补RNA非常强烈，与同一阵列的DNA和RNA相比，RNA结合能力更高，并且具有出色的阵列特异性。在这项研究中，通过利用这种特征进行以下两项研究。 1）近年来，已经透露，有许多称为miRNA的小型RNA，并且它控制了广泛的生活功能，并且在各种条件下检查生活中的miRNA数量已成为生命科学中的重要问题。我来了。在这项研究中，我们开发了一个PNA阵列来检测具有高灵敏度的miRNA，利用了PNA特征特异性结合与RNA的特征。目前迫切需要检查各种细胞中的miRNA表达量，尤其是在各种疾病中。因此，基于miRNA验证了PNA阵列的能力，这与该疾病有关。使用10 -mer PNA探针，与通常用于检测miRNA的DNA探针（10mer和20mer）相比，可以检测非常敏感的检测。 2）作为从RNA混合物中纯化单个RNA物种的方法，我们使用PNA作为固相载体的简单RNA纯化方法开发。它表明固定PNA方法是一种可以在低温下分离RNA并扩展到许多RNA的方法。

项目成果

期刊论文数量（50）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

EF-Tu変異体によるアミノアシルtRNAの精製・定量法

使用 EF-Tu 突变体纯化和定量氨酰基-tRNA

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
山本浩道;土井芳朗;大槻高史;宍戸昌彦
通讯作者：
宍戸昌彦

酵素法を用いるアミノ酸の計測

使用酶法测量氨基酸

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
Endoh;T.;Sisido M. and Ohtsuki;T.;山原裕輔;Ryo Shintani;佐藤麻恵;桑原里奈;片山和浩;新谷諒;三戸沙耶香;大槻高史;中井槙子;Takashi Ohtsuki;Yoshikazu Sugimoto;大槻高史;Kohji Noguchi;小原香・大槻高史・釘宮章光
通讯作者：
小原香・大槻高史・釘宮章光

哺乳細胞を用いた非天然アミノ酸導入蛋白質合成法の開発

开发利用哺乳动物细胞的非天然氨基酸合成蛋白质的方法