小胞体t/Q-SNARE複合体の多様な役割の解明

阐明内质网 t/Q-SNARE 复合物的多种作用

基本信息

批准号：
18050036
负责人：
多賀谷光男
金额：
$ 4.22万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050036/
关键词：
Sintaxin18 NAG BNIP1 カーゴ受容体小胞体小胞輸送 Syntaxin18

项目摘要

SNAREは小胞輸送の膜融合に関与するタンパク質である。我々は、動物細胞の小胞体に存在するSNAREであるsyntaxin18 (Syn18)が、ZW10、 RINT-1、 BNIP1、 p31などと結合していることを見いだした。また、昨年度の研究でSyn18複合体の新たな成分としてNAG (Neuroblastoma Amplified Gene)タンパク質を同定した。本年度は以下の研究を行った。1)p31と相互作用するNAGの機能解析Syn18複合体中で、p31/RINT-1/ZW10はサブコンプレックスを形成している。このサブコンプレックス中にNAGが含まれることを明らかにした。また、p31のN末端6-11アミノ酸領域が直接NAGと結合していることを示唆する結果を得た。NAGをRNAi法でノックダウンしたところ、p31のタンパク質量が減少するということを見いだした。また、不思議なことに、NAGの発現抑制はゴルジ体の形態には変化を与えなかったが、リソソームやエンドソームの局在が少し変化した。現在、NAGの発現抑制によって、小胞体-ゴルジ体のタンパク質輸送が影響を受けるかどうかを調べている。2)BNIP1結合タンパク質の解析昨年度行ったTwo-hybridスクリーニングで、カーゴ受容体と考えられているp24ファミリーの一つであるp23が、BNIP1と相互作用することが示された。内在性のp23とBNIP1の結合を確認するために、p23の抗体を作製して免疫沈降を行ったが、内在性タンパク質同士の結合は認められなかった。現在、YFP-p23の安定発現株の作製を進めており、この細胞株が樹立できたら、BNIP1との相互作用についてさらに詳細に解析を進める予定である。3)ノックアウト細胞を用いたp31の解析p31ノックアウトマウスは胎生致死であり、この遺伝子は発生に必須である。Flox/Floxマウスから調製したMEFにAde-Creリコンビナーゼを感染させたところ、p31の減少に伴って小胞体が分断された。さらに時間が経過すると小胞体は巨大な空胞となり、同時に小胞体ストレス反応が誘起されてアポトーシスが起こることが判明した。研究協力者:青木健洋(東京薬科大学・生命科学研究科・博士後期課程院生)

SNARE是一种参与细胞转运的膜融合的蛋白质。我们发现，存在于动物细胞中的语法（SYN18）与ZW10，RINT-1，BNIP1，P31等结合。在去年的研究中，NAG（神经母细胞瘤扩增基因）蛋白被确定为Syn18复合物的新成分。今年，进行了以下研究。 1）p31/rint-1/zw10在与p31相互作用的NAG功能分析的功能分析中形成了一个子复合物。据揭示了在此子络合物中包括NAG。它还表明，p31 N末端6-11氨基酸区域直接与NAG结合。我发现，当我通过RNAi方法击倒NAG时，p31的蛋白质质量减少了。令人惊讶的是，对Nag表达的抑制并没有改变高尔基体的形式，而是溶酶体和末端的定位略有变化。当前，NAG表达的抑制是研究呼吸机 - 戈吉体的蛋白质转运是否受到影响。 2）BNIP1结合蛋白分析在去年的两杂化筛选中，结果表明，被认为是货物受体的P24家族之一P23与BNIP1相互作用。为了确认内部p23和BNIP1的结合，制备了p23的抗体并进行免疫沉积物，但不允许内部蛋白质的结合。目前，正在促进YFP-P23稳定表达的产生，一旦建立了该细胞量，我们计划进一步分析与BNIP1的相互作用。 3）使用基因敲除细胞p31基因敲除小鼠对p31进行分析是胎儿混合物，该基因对于发生至关重要。当用Flox/Flox小鼠制备的MEF感染ADE-CRE重组酶时，将内溶解分裂随p31的降低而划分。随着时间的流逝，Thexystyton的末端变成了巨大的空细胞，发现凋亡是由于同时诱导了审美应力反应而发生的。研究公司 - 工作人员：Kenhiro Aoki（东京制药大学，研究生科学研究生院，医生研究生院）