小胞体t/Q-SNARE複合体の多様な役割の解明

阐明内质网 t/Q-SNARE 复合物的多种作用

基本信息

批准号：
18050036
负责人：
多賀谷光男
金额：
$ 4.22万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050036/
关键词：
Sintaxin18 NAG BNIP1 カーゴ受容体小胞体小胞輸送 Syntaxin18

项目摘要

SNAREは小胞輸送の膜融合に関与するタンパク質である。我々は、動物細胞の小胞体に存在するSNAREであるsyntaxin18 (Syn18)が、ZW10、 RINT-1、 BNIP1、 p31などと結合していることを見いだした。また、昨年度の研究でSyn18複合体の新たな成分としてNAG (Neuroblastoma Amplified Gene)タンパク質を同定した。本年度は以下の研究を行った。1)p31と相互作用するNAGの機能解析Syn18複合体中で、p31/RINT-1/ZW10はサブコンプレックスを形成している。このサブコンプレックス中にNAGが含まれることを明らかにした。また、p31のN末端6-11アミノ酸領域が直接NAGと結合していることを示唆する結果を得た。NAGをRNAi法でノックダウンしたところ、p31のタンパク質量が減少するということを見いだした。また、不思議なことに、NAGの発現抑制はゴルジ体の形態には変化を与えなかったが、リソソームやエンドソームの局在が少し変化した。現在、NAGの発現抑制によって、小胞体-ゴルジ体のタンパク質輸送が影響を受けるかどうかを調べている。2)BNIP1結合タンパク質の解析昨年度行ったTwo-hybridスクリーニングで、カーゴ受容体と考えられているp24ファミリーの一つであるp23が、BNIP1と相互作用することが示された。内在性のp23とBNIP1の結合を確認するために、p23の抗体を作製して免疫沈降を行ったが、内在性タンパク質同士の結合は認められなかった。現在、YFP-p23の安定発現株の作製を進めており、この細胞株が樹立できたら、BNIP1との相互作用についてさらに詳細に解析を進める予定である。3)ノックアウト細胞を用いたp31の解析p31ノックアウトマウスは胎生致死であり、この遺伝子は発生に必須である。Flox/Floxマウスから調製したMEFにAde-Creリコンビナーゼを感染させたところ、p31の減少に伴って小胞体が分断された。さらに時間が経過すると小胞体は巨大な空胞となり、同時に小胞体ストレス反応が誘起されてアポトーシスが起こることが判明した。研究協力者:青木健洋(東京薬科大学・生命科学研究科・博士後期課程院生)

SNARE是一种参与囊泡转运的膜融合的蛋白质。我们发现，语法（Syn18）是一种与ZW10，RINT-1，BNIP1，p31等结合的动物细胞内质网中的网罗。此外，去年的研究将NAG（神经母细胞瘤扩增基因）蛋白确定为Syn18复合物的新成分。今年，我们进行了以下研究：1）与Syn18复合物中与p31相互作用的NAG的功能分析，p31/rint-1/zw10形成了一个子复合。据揭示了na词包含在此子复合体中。此外，结果表明，p31的N末端6-11氨基酸区域直接与NAG结合。当使用RNAi方法将NAG击倒时，发现p31蛋白的量减少了。同样，奇怪的是，对NAG表达的抑制并没有改变高尔基体的形态，但是溶酶体和内体的定位略有变化。我们目前正在研究NAG表达抑制是否会影响内质网状高尔基蛋白的转运。 2）去年对BNIP1结合蛋白的分析，去年进行了两次杂交筛查表明，p23是P23家族之一，被认为是货物受体，与BNIP1相互作用。为了确认内源性p23和BNIP1的结合，制备了p23的抗体并进行免疫沉淀，但没有观察到内源性蛋白质之间的结合。我们目前正在开发YFP-P23的稳定表达菌株，一旦建立了该细胞系，我们计划进一步分析其与BNIP1的相互作用。 3）使用基因敲除细胞p31基因敲除小鼠对p31进行分析是胚胎致死的，该基因对于发育至关重要。当用ADE-CRE重组酶感染了从Flox/Flox小鼠制备的MEF时，将内质网被划分，p31降低。此外，随着时间的流逝，内质网成为一种巨型液泡，同时，发现诱导内质网应激反应，从而导致细胞凋亡。研究合作者：Aoki Kenhiro（东京制药科学大学生命科学博士研究生院）