動物細胞における小胞体膜の動態と小胞体-ゴルジ体間の膜輸送の解析

动物细胞内质网膜动力学及内质网-高尔基体膜转运分析

基本信息

批准号：
16044242
负责人：
多賀谷光男
金额：
$ 3.9万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16044242/
关键词：
Syntaxin18 RINT-1 Sec16p COPII 小胞体小胞輸送ゴルジ体 ZW10 reticulon

项目摘要

分泌系タンパク質は小胞体(ER)で合成され、微小管上を移動する輸送小胞によってゴルジ体へと運ばれた後に最終目的地へと向う。小胞体上にはER exit site(ERES)と呼ばれるサブドメインが存在し、そこでゴルジ体へのタンパク質輸送(順行輸送)を司るCOPII小胞が形成される。順行輸送に伴ってゴルジ体へと輸送された膜タンパク質の一部は逆行輸送によって小胞体へともどされ、再利用される。小胞体における膜融合はsyntaxin18(Syn18)複合体によって媒介されると考えられている。Syn18複合体:Syn18複合体は、膜内在性サブユニットのSyn18、BNIP1、p31、Sec22bと、膜表在性サブユニットのZW10、RINT-1、Sly1pなどから成る。本年度は、RINT-1がZW10(微小管のモーターであるダイニン-ダイナクチンと相互作用するタンパク質)を小胞体上のSyn18につなぎ止める役割を持つことを示した。また、RINT-1がZW10と同様に小胞体からゴルジ体への順行輸送に直接的に関与することを明らかにした。COPII小胞の形成機構:p125はCOPII小胞のコート成分であるSec23pと結合するタンパク質として同定されていたが、本年度はRNAi法を用いてp125がERESの構築に関与していることを明らかにした。ERESの構造が乱されると、ゴルジ体の構造も変化したが、VSV-Gタンパク質の輸送には影響が見られなかった。酵母Sec16pはCOPII小胞形成に重要な因子であるが、今までその動物オルソログは発見されていなかった。Sec23p結合樹脂を用いてアフィニティ精製された250kDaタンパク質(p250)の部分配列を決定したところ、弱いながらも酵母Sec16pと構造類似性を有するタンパク質であることが判明した。現在その機能を解析している。

分泌蛋白是在内质网（ER）中合成的，该蛋白质通过在前往最终目的地之前通过微管传播的传输囊泡运输到高尔基体。在内质网上有一个称为ER出口位点（ER）的子域，其中形成了Copii囊泡（控制蛋白质转运（前传输）向高尔基体体）。通过逆行运输并回收，将带有前进运输的一部分膜蛋白通过前进运输运输到高尔基体。内质网中的膜融合被认为是由语法（Syn18）复合物介导的。 SYN18复合物：Syn18复合物由子宫内膜亚基Syn18，BNIP1，P31，SEC22B和浅表膜亚基ZW10，RINT-1，SLY1P等组成。今年，我们证明了RINT-1在连接ZW10（一种与Dynein-dynactin相互作用的蛋白质，微管的运动蛋白相互作用）与syn18上的蛋白质上的作用。还揭示了RINT-1直接参与了从内质网向高尔基体的正向转运，类似于ZW10。 Copii囊泡形成的机理：P125被鉴定为与Copii囊泡的涂层成分结合的蛋白质，但在今年，发现P125与RNAi方法有关ERES的构建。 ERES结构的破坏也改变了高尔基体的结构，但没有发现对VSV-G蛋白转运的影响。酵母菌Sec16p是Copii囊泡形成的重要因素，但到目前为止尚未发现动物直系同源物。确定了使用SEC23P结合树脂的亲和纯化250 kDa蛋白（P250）的子序列，尽管它很弱，但发现它是与酵母Sec16p结构相似的蛋白质。目前，正在分析其功能。