Sntaxin 18複合体 : 順行輸送と逆行輸送のインターフェイス

Sntaxin 18 复合物：顺行和逆行运输之间的界面

基本信息

批准号：
19036032
负责人：
多賀谷光男
金额：
$ 4.03万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19036032/
关键词：
組織・細胞小胞体蛋白質膜輸送 SNARE Syntaxin18 ZW10 RINT-1 p31(Use1p)小胞輸送

项目摘要

SNARE(SNAP receptor)は細胞内膜融合を司るタンパク質であり、ターゲット膜に存在する3つのt-SNAREと小胞に存在する1つのv-SNAREが強固に結合することで膜融合だ引き起こされる。膜融合後、α-SNAPを介してシャペロン様ATPaseであるNSFがSNARE複合体を解離させる。以前の研究で我々は、小胞体に局在するt-SNAREであるsyntaxin18(Syn18)を見い出し、Syn18が種々のタンパク質と複合体を形成していることを明らかにした。本研究では、Syn18複合体の新たなサブユニットとしてNAG(Neuroblastoma-amplified gene)タンパク質を同定した。NAGはp31、RINT-1、ZW10とサブコンプレックスを形成しており、p31との結合にはN末端領域(1-1035 アミノ酸)が、ZW10/RINT-1との結合にはC末端領域(1036-2371 アミノ酸)が関与する。一方、p31のNAG結合部位は、そのN末端10アミノ酸の領域である。NAGの発現をRNAi法で抑制すると、ゴルジ体から小胞体への逆行輸送が阻害された。ジギトニンを使って細胞膜にだけ孔を開け、サイトゾルおよび細胞骨格に強く結合していない膜を細胞から流出させると、NAG発現抑制細胞においてはERGIC-53(小胞体とゴルジ体の中間区画のマーカータンパク質)を含む小胞が細胞外へと流失した。一方、発現抑制していない細胞ではそのような現象が見られなかった。これらの結果から、NAGはゴルジ体から小胞体への逆行輸送に関与する小胞と小胞体膜の繋留に関与することが示唆された。研究協力者 : 青木健洋(東京薬科大学・生命科学研究科・博士後期課程院生)

小网罗（SNAP受体）是控制细胞内膜融合的蛋白质，膜融合是由三个t-snares在靶膜上的强结合和囊泡中的一个V-snares引起的。膜融合后，NSF（一种类似伴侣的ATPase）通过α-SNAP解离SNARE复合物。在先前的研究中，我们发现Syntaxin18（Syn18）是一种定位于内质网的T-SNARE，揭示了Syn18与各种蛋白质形成复合物。在这项研究中，我们确定了NAG（神经母细胞瘤扩增基因）蛋白是Syn18复合物的新亚基。 NAG与p31，RINT-1和ZW10的NAG形式的子复合物以及N末端区域（1-1035氨基酸）与与p31的结合有关，并且C末端区域（1036-2371氨基酸）与ZW10/RINT-1的结合涉及。另一方面，p31的NAG结合位点是其N末端10氨基酸的区域。使用RNAi方法对NAG表达的抑制抑制了从高尔基体到内质网的逆行转运。当数字蛋白仅在细胞膜中制成毛孔时，并从细胞中排出不与细胞质和细胞骨架没有密切结合的膜（含有ERGIC-53的囊泡）（一种标记蛋白（在胚层ret虫中间隔层中间隔室中的中间体中的标记蛋白）的囊泡损失。另一方面，在未抑制的细胞中没有观察到这种现象。这些结果表明，NAG参与了从高尔基体到内质网的逆行转运的囊泡和内质网膜的束缚。研究合作者：Aoki Kenhiro（东京制药科学大学生命科学博士研究生院）