膜小胞輸送における新規カーゴ受容体Alcadeinの機能解析

新型货物受体 Alcadein 在膜囊泡运输中的功能分析

基本信息

批准号：
18050001
负责人：
鈴木利治
金额：
$ 4.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050001/
关键词：
小胞輸送軸索キネシン神経モーター分子 JIP

项目摘要

アルカデイン(Alc)は、申請者が見いだしたI型の膜タンパク質である。Alcの細胞質ドメインは、kinesin-1モーターの軽鎖(KLC)と結合する新規モチーフを含んでおり、kinsein-1のカーゴ受容体として機能していることを発表した(EMBO J.[2007]26,1475-1486)。解析が進展しているモーターファミリー分子KIFに比較して、カーゴ受容体の解析はほとんど進んでいない。Alcがkinesin-1のカーゴ受容体として、どのような特性を持ているのかを解析した。GFP-KLCをAlcと共に神経細胞に共発現させると、Alcはkinesin-1分子を組み立てGFP-KLCがが小胞輸送された。この活性は、おなじKLC結合タンパク質JIP1bでは観察できない。Kinesin-1モーターを機能的に組み立てる活性領域を同定する目的で、各種Alc細胞質ドメイン欠失変異体をGFP-KLCと共に共発現させ、Alc細胞質ドメインの機能領域を同定した。EGF受容体の細胞質ドメインをAlcの機能ドメインに入れ替えたキメラタンパク質は、kinesi-1をAlcと同様に組み立て効果的な小胞輸送活性を示す実験から、機能ドメイン最小単位の同定に成功した。現在、カーゴ受容体がモーター分子を活性化する詳細な分子機構に関する解析を進めている。

碱（ALC）是申请人发现的I型膜蛋白。 ALC的细胞质结构域包含一个与驱动蛋白-1运动的轻链（KLC）结合的新基序，并以Kinsein-1的货物受体作用（Embo J. [2007] 26,1475-1486）。与具有晚期分析的运动家族分子KIF相比，货物受体分析几乎没有进展。我们分析了ALC作为驱动蛋白1的货物受体的性质。当GFP-KLC与ALC在神经元中共表达时，ALC组装了一个驱动蛋白-1分子，并将GFP-KLC转运。使用相同的KLC结合蛋白JIP1B观察到这种活性。为了鉴定在功能上组装动力蛋白-1电动机的活性区域，将各种ALC细胞质缺失突变体与GFP-KLC共表达，以识别ALC细胞质结构域的功能区域。嵌合蛋白用ALC的功能结构域取代了EGF受体的细胞质结构域，从表现出有效的囊泡转运活性的实验中成功鉴定了最小的功能域单位，类似于ALC。当前，我们正在对货物受体激活运动分子的分子机制进行详细分析。