新規Gene-Trap法による多段階の白血病発症に関わる遺伝子単離の試み

尝试使用新型基因陷阱方法分离参与多阶段白血病发展的基因

• 批准号: 18012032
• 负责人: 松村 到
• 金额: $ 6.4万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18012032/
• 关键词: チロシンキナーゼ; 白血病; Gene-Trap法

多段階の白血病発症機構を明らかにするために、特発性好酸球増加症/好酸球性白血病の原因遺伝子FIPIL1/PDGFRα及びその変異体を造血幹細胞、骨髄系共通前駆細胞、リンパ系共通前駆細胞、骨髄単球系前駆細胞、赤巨核球系前駆細胞などに導入し、これらの細胞の系統決定、増殖、生存、腫瘍化に及ぼす影響を検討した。その結果、FIPIL1/PDGFRαは、いずれの細胞に導入された場合もサイトカイン非依存性の増殖を可能にするが、造血幹細胞に導入された場合のみ永続的な細胞増殖を伴う腫瘍化をもたらし、前駆細胞レベルに導入した場合には腫瘍化をもたらさないことが明らかとなった。また、リンパ系共通前駆細胞、赤巨核球系前駆細胞などに導入した場合、好酸球系への系統転換が誘導された。FIPIL1/PDGFRaと協調して前駆細胞を不死化する遺伝子を単離するために、テトラサイクリン除去(Tet-off)により遺伝子発現を誘導するプロモーターとERM Tagのついたキメラ蛋白として遺伝子発現を起こさせるためのスプライスドナー(SD)の発現カセットが組み込まれたERMレトロベクターを用いて内因性の遺伝子の発現をランダムに誘導することのできる新規Gene-Trap法を用いた。ERMレトロベクターをFIPIL1/PDGFRα、変異型FLTなどの活性化チロシンキナーゼと同時に骨髄系共通前駆細胞に感染させ、サイトカイン非存在下で増殖する不死化した白血病クローンの樹立に成功した。また、同様の手法でAML1/MTG8とERMレトロベクターを感染させた骨髄系共通前駆細胞から白血病クローンの単離にも成功した。更に、これらの白血病クローンからGene-Trapベクターによって発現が誘導された遺伝子の単離を完了した。

为了阐明白血病的多步发展机制，我们研究了特发性嗜酸性粒细胞增多/嗜酸性粒细胞白血病的致病基因FIPIL1/PDGFRα及其变异体在造血干细胞、骨髓共同祖细胞和淋巴共同祖细胞中的细胞。研究了骨髓单核祖细胞、红巨核祖细胞等细胞的谱系决定、增殖、存活和肿瘤发生的影响。结果，FIPIL1/PDGFRα在被引入任何类型的细胞时能够实现细胞因子独立的增殖，但只有当被引入造血干细胞时才会导致肿瘤发生并伴随持续的细胞增殖，从而导致祖细胞。水平，不会导致肿瘤发生。此外，当引入淋巴共同祖细胞、红色巨核细胞祖细胞等时，诱导谱系转变为嗜酸性谱系。为了分离与 FIPIL1/PDGFRa 配合使祖细胞永生化的基因，并产生具有 ERM 标签和通过四环素去除诱导基因表达的启动子的嵌合蛋白的基因表达（Tet-off），我们使用了一种新的基因。使用含有剪接供体 (SD) 表达盒的 ERM 逆向载体，可以随机诱导内源基因表达的 Trap 方法。通过用 ERM 逆转录载体和激活的酪氨酸激酶（如 FIPIL1/PDGFRα 和突变体 FLT）感染骨髓共同祖细胞，我们成功建立了永生化白血病克隆，该克隆在没有细胞因子的情况下也能增殖。我们还使用类似的方法成功地从感染 AML1/MTG8 和 ERM 逆转录病毒的骨髓共同祖细胞中分离出白血病克隆。此外，我们还完成了从这些白血病克隆中分离出由 Gene-Trap 载体诱导表达的基因。

项目成果

The scaffolding adapter Gab2, via Shp-2, regulates kit-evoked mast cell proliferation by activating the Rac/JNK pathway

• DOI: 10.1074/jbc.m603742200
• 发表时间: 2006-09-29
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Yu, Min;Luo, Jincai;Gu, Haihua
• 通讯作者: Gu, Haihua

Molecular basis of clonal expansion of hematopoiesis in 2 patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH)

• DOI: 10.1182/blood-2006-05-025148
• 发表时间: 2006-12-15
• 期刊: BLOOD
• 影响因子: 20.3
• 作者: Inoue, Norimitsu;Izui-Sarumaru, Tomohisa;Kinoshita, Taroh
• 通讯作者: Kinoshita, Taroh

Diffuse large B-cell lymphoma in the young in Japan: A study by the Osaka Lymphoma Study Group.

日本年轻人的弥漫性大 B 细胞淋巴瘤：大阪淋巴瘤研究小组的一项研究。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Am J Hematol 82
• 作者: Yamauchi A;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Role of DNA methylation for expression of novel stem cell marker CDCP1 in hematopoietic cells

• DOI: 10.1038/sj.leu.2404312
• 发表时间: 2006-09-01
• 期刊: LEUKEMIA
• 影响因子: 11.4
• 作者: Kimura, H.;Morii, E.;Aozasa, K.
• 通讯作者: Aozasa, K.

Establishment of stroma-free cultures for human B lymphopoiesis: Roles of high cell density condition and mesenchymal stem cell-secreted factors.

人 B 淋巴细胞生成无基质培养物的建立：高细胞密度条件和间充质干细胞分泌因子的作用。

• 发表时间: 2007
• 作者: Ichii M;et. al.
• 通讯作者: et. al.