活性酸素種による細胞死誘導と腫瘍細胞での解除機構の解析

活性氧诱导细胞死亡及肿瘤细胞释放机制分析

• 批准号: 13214059
• 负责人: 松村 到
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214059/
• 关键词: ROS; NF-κB; MnSOD; c-myc; E2F1

本研究では細胞周期制御とアポトーシスの関連をc-myc、E2F1、cyclin D1を過剰発現させた繊維芽細胞株NIH3T3、骨髄性細胞株M1を用いて解析した。c-myc、E2F1を過剰発現させたNIH3T3はMockのクローンと比較すると血清除去によるアポトーシスに高い感受性を示した。これらのクローンではMockのクローンと異なり血清存在下でも活性酸素種(ROS)が蓄積し、血清除去した際、Mockのクローンと比較してより多くのROSが蓄積した。MnSODの過剰発現やカタラーゼ処理によりROSを消去するとアポトーシス感受性亢進が解除され、このアポトーシス感受性亢進にはROSが関与すると考えられた。また、Mockのクローンでは血清を除去した際、ROSによってNF-kBが活性化されMnSODの発現が誘導されたが、c-myc、E2Fを過剰発現させたクローンではE2F1がNF-kBのsubunit p65に結合し機能的なNF-kB(P65とP50のヘテロダイマー)の形成を阻害するためMnSODの発現誘導が阻害されていた(Molecular Cell, in press)。M1はIL-6に反応してアポトーシスに陥るが、E2F1、cyclin D1を過剰発現させたM1は、Mockのクローンと比較して高いアポトーシス感受性を示した。M1においてもE2F1、cyclin D1の過剰発現はROSを蓄積させ、IL-6添加後Mockのクローンと比較するとより多くのROSが蓄積した。E2F1、cyclin D1を過剰発現するM1では、NIH3T3の場合と同様に、NF-κBの機能が抑制されていたが、MnSODの発現は阻害されていなかった。この結果から、M1ではNF-κB以外の分子もMnSODの発現を制御していると考えられた。現在、これらのクローンにおけるMnSODの発現誘導機構及びc-myc、E2F1によるROSの蓄積機構を検討中である。

在本研究中，我们使用过表达 c-myc、E2F1 和细胞周期蛋白 D1 的成纤维细胞系 NIH3T3 和骨髓细胞系 M1 分析了细胞周期控制与细胞凋亡之间的关系。与模拟克隆相比，过表达 c-myc 和 E2F1 的 NIH3T3 对血清撤除诱导的细胞凋亡具有更高的敏感性。与模拟克隆不同，这些克隆即使在血清存在的情况下也会积累活性氧（ROS），并且当血清被去除时，比模拟克隆中积累更多的ROS。通过过表达 MnSOD 或用过氧化氢酶处理来消除 ROS，消除了细胞凋亡敏感性的增加，表明 ROS 参与了细胞凋亡敏感性的增加。此外，当从模拟克隆中除去血清时，NF-kB被ROS激活并诱导MnSOD表达，而在过表达c-myc和E2F的克隆中，E2F1是NF-kB p65的亚基，MnSOD表达的诱导被抑制。被抑制是因为它结合并抑制功能性 NF-kB（P65 和 P50 的异二聚体）的形成（Molecular Cell，出版中）。 M1 响应 IL-6 发生细胞凋亡，但与模拟克隆相比，过表达 E2F1 和细胞周期蛋白 D1 的 M1 显示出更高的细胞凋亡敏感性。 E2F1和细胞周期蛋白D1的过表达也在M1中积累了ROS，并且与模拟克隆相比，添加IL-6后积累了更多的ROS。在过表达 E2F1 和细胞周期蛋白 D1 的 M1 中，NF-κB 功能受到抑制，但 MnSOD 表达没有受到抑制，如 NIH3T3 的情况一样。这些结果表明除 NF-κB 之外的分子也调节 M1 中 MnSOD 的表达。我们目前正在研究这些克隆中 c-myc 和 E2F1 诱导 MnSOD 表达和 ROS 积累的机制。

项目成果

Tanaka, H., et al.: "E2F-1 and c-Myc potentiate apoptosis through inhibition NF-κB activitiy that facilitates MnSOD-mediated ROS elimination"Molecular Cell. (in press).

Tanaka, H. 等人：“E2F-1 和 c-Myc 通过抑制 NF-κB 激活促进细胞凋亡，从而促进 MnSOD 介导的 ROS 消除”《分子细胞》（正在出版）。

Ueda, S., et al.: "Critical roles of c-kit tyrosine residues 567 and 719 in stem cell cell factor-induced chemotaxis : contribution of src family kinase and PI3-kinase on calcium mobilization and cell migration"Blood. (in press).

Ueda, S. 等人：“c-kit 酪氨酸残基 567 和 719 在干细胞细胞因子诱导的趋化性中的关键作用：src 家族激酶和 PI3 激酶对钙动员和细胞迁移的贡献”血液。