Rap1/RAPLによる抗原提示細胞DCの免疫監視調節機構の解明

Rap1/RAPL阐明抗原呈递DC的免疫监视调节机制

• 批准号: 17047019
• 负责人: 片桐 晃子
• 金额: $ 5.38万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17047019/
• 关键词: Rapl; RAPL; STK; TCR; chemokine; LFA-1; ICAM-1; activation; Rap1; Adhesion; proliferation; inflammation; autoimmune; lymphoma; DC

1)目的RAPLを欠損するマウスでは、加齢すると自己免疫疾患及びB cell lymphomaを発症する。RAPLが増殖応答を制御している可能性を検討した。2)方法及び結果RAPL欠損マウスでは、8-12mnth oldで、脾腫とともに自己免疫性の糸球体腎炎を発症することが分かった。T及びB細胞数の増加が認められ、CD44+CD62L-のeffector/memory T cellの割合の増加及びCD138+のPlasma cellの増加も認められた。また、12 montholdで30%以上のマウスでmature B cellタイプのLymphomaが発症することがわかった。IgHの再構成をSouthern blotで検討し、monoclonalであることが確かめられた。そこで、RAPL欠損丁及びB細胞のTCR及びBCR刺激による増殖反応を3H-Thymidineの取込みを調べるとともに、BrdU/7AAD染色によってcell cycle解析を行ったところ、RAPL欠損リンパ球は正常リンパ球に比べ、Sphaseへの移行が1.5〜2倍程度亢進していることが判明した。この原因を追求するため、まずearly signalついて、Erk及びIκBαのリン酸化を指標に検討したが、亢進は認められなかった。G1からS期への移行に関与するCyclinD/Eの発現にも違いは認められなかった。in vitroで、Cdk4の活性をRb-GST、Cdk2の活性をHistoneを基質として検討したところ、Cdk4の活性には差が認められなかったが、Cdk2のkinase活性が2倍程度R紐L欠損T及びBリンパ球では亢進していることが明らかとなった。3)考察RAPLは、TCR及びBCR刺激によるリンパ球の増殖反応の抑制分子として重要な働きをしており、その欠如は自己免疫病発症につながることが示唆された。

1) 目的 缺乏 RAPL 的小鼠随着年龄的增长会出现自身免疫性疾病和 B 细胞淋巴瘤。我们研究了 RAPL 控制增殖反应的可能性。 2）方法和结果我们发现RAPL缺陷小鼠在8-12个月大时出现脾肿大和自身免疫性肾小球肾炎。观察到 T 细胞和 B 细胞数量增加，CD44+CD62L-效应/记忆 T 细胞比例增加，CD138+ 浆细胞增加。此外，还发现超过 30% 的小鼠在 12 个月大时出现成熟 B 细胞型淋巴瘤。使用Southern印迹检查IgH的重建，并证实它是单克隆的。因此，我们研究了TCR和BCR刺激下RAPL缺陷型淋巴细胞和B细胞的增殖反应，检查了3H-胸苷的摄取，并使用BrdU/7AAD染色进行了细胞周期分析，发现RAPL缺陷型淋巴细胞具有更高的增殖反应。结果发现，向S相的转变加速了约1.5至2倍。为了调查其原因，我们首先使用 Erk 和 IκBα 磷酸化作为指标研究了早期信号，但没有观察到增强。 CyclinD/E 的表达没有观察到差异，CyclinD/E 参与从 G1 期向 S 期的转变。在体外，当使用Rb-GST检查Cdk4活性并使用组蛋白作为底物检查Cdk2活性时，未观察到Cdk4活性差异，但Cdk2的激酶活性约为R弦L缺陷T的两倍。结果表明，它在B淋巴细胞和B淋巴细胞中增强。 3)讨论RAPL作为抑制TCR和BCR刺激的淋巴细胞增殖反应的分子发挥着重要作用，其缺陷被认为会导致自身免疫性疾病的发生。