Rap1/RAPLによる抗原提示細胞DCの免疫監視調節機構の解明

Rap1/RAPL阐明抗原呈递DC的免疫监视调节机制

基本信息

批准号：
16043227
负责人：
片桐晃子
金额：
$ 3.14万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

活発な生体内移動をしながら免疫応答を制御する樹状細胞の、遊走の分子基盤は明かとなっていない。低分子量G蛋白質Rap1の下流標的分子RAPLが、樹状細胞に多く発現することを見い出したので、Rap1活性化及びRAPLが樹状細胞におけるケモカインを介する接着及び遊走に関与するかどうかをin vitroで検討するとともに、生体内において、樹状細胞のランゲルハンス細胞の定常状態及び炎症時における所属リンパ節への移動を解析した。正常DCをフィブロネクチン上でケモカイン刺激すると速やかに接着し一極にラッフル膜を形成し移動を開始するが、RAPL欠損DC、Rap1活性抑制分子Spa-1発現DCをケモカイン刺激すると、むしろ浮き上がってくることが判明した。樹状細胞においてもケモカインを介する接着及び遊走は、Rap1及びRAPLに依存していることが判明した。表面リンパ節のサブセット解析によって、CD11c陽性Langerin陽性細胞が低下していることから、定常状態での樹状細胞の移動能力が低下していることが判明した。また炎症時の遊走を調べるため、皮膚にFITCを塗布し、所属リンパ節におけるFITCを取り込んだIa強陽性の皮膚由来のDC数を調べたところ、正常マウスに比べ、顕著な低下が認められた。このことから、Rap1活性化及びRAPLは樹状細胞の生体内での移動にも重要であることが明かとなった。

未揭示在体内主动迁移时调节免疫反应的树突状细胞迁移的分子基础。由于我们发现在树突状细胞中高度表达了下游靶标分子RAPL，因此我们在体外研究了RAP1激活和RAPL是否参与趋化因子介导的树突状细胞中的趋化因子介导的粘附和迁移，并且我们分析了在易发症中对树突状细胞的稳定态细胞的稳定状态。当正常的DC在纤连蛋白上刺激时，它们会迅速彼此粘附，形成一个极点上的荷叶膜并开始迁移，但是当趋化因子刺激Rapl缺陷型DC和表达RAP1活性抑制剂的Rapl缺陷的DC和DCS时，它们被发现更为突出。趋化因子介导的粘附和迁移还依赖于树突状细胞中的RAP1和RAPL。表面淋巴结的子集分析表明，CD11C阳性的链球菌阳性细胞的下降导致树突状细胞以稳定态迁移的能力降低。此外，为了研究炎症期间的迁移，将FITC应用于皮肤和源自强的IA阳性皮肤的DC数量，其中将FITC纳入了区域淋巴结中，并发现与正常小鼠相比，发现大量降低。这表明RAP1激活和RAPL对于体内树突状细胞的迁移也很重要。