扁桃体特異的遺伝子操作マウスの作成

创造杏仁核特异性基因工程小鼠

基本信息

批准号：
17024018
负责人：
森寿
金额：
$ 1.54万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17024018/
关键词：
扁桃体遺伝子操作マウス BAC

项目摘要

本研究は、情動制御に重要な脳部位のうち、扁桃体神経核特異的に遺伝子操作を可能とするC57BL/6近交系の遺伝的背景を持ったマウス系統を樹立することを目的としている。C57BL/6系統マウスは、近交系として行動学的データーの蓄積があり学習能力に優れていること、新潟大脳研の崎村教授らにより樹立された生殖伝達効率の高い胚性幹(ES)細胞が存在すること、ゲノム情報が利用できるとともにゲノム遺伝子断片をバクテリア人工染色体(BAC)に組み込んだライブラリーが利用可能であること、などの利点がある。本年度は、扁桃体外側核ならびに内側核にそれぞれ選択性の高い発現を示すGastrin-releasing Peptide(GRP)ならびにLIM homeodomain protein 7/8のゲノム遺伝子に薬剤活性誘導型の遺伝子組換え酵素CrePR遺伝子を挿入したマウス系統、ならびにCre活性依存的にNMDA受容体のドミナントネガティブ体を発現するマウス系統の作成を進めた。従来の方法による標的遺伝子組み換えベクター(TV)の構築では、制限酵素を用いたゲノム遺伝子断片のクローニングや精製ステップが複数回必要であり、労力と時間を要した。一方、近年BACと相同遺伝子組換え酵素を用いて、大腸菌内でBACを遺伝子操作する方法が開発されてきた。我々は、その方法の一つであるCounter-selection BAC modification kit(GENE BRIDGES社)の薬剤耐性マーカーの改変、なちびに最終的にゲノム断片をクローニングするTVの配列を改変することにより、約1ヶ月でTVを作成する方法を確立した。これらの改変によりTV作成が容易になり、様々なTV作成に利用できるとともに、BACを用いた系統的な遺伝子操作が可能になった。現在作成したTVをES細胞に遺伝子導入し、標的遺伝子組み換えES細胞の取得を進めている。このうち、GRP-CrePRについては、相同組み換えESクローン候補を得た。

本研究的目的是建立一种具有 C57BL/6 近交遗传背景的小鼠品系，该品系允许对杏仁核（对于情绪调节很重要的大脑区域）进行基因操作。作为近交系，C57BL/6小鼠品系积累了行为数据并具有出色的学习能力，是新泻脑研究所Sakimura教授及其同事建立的具有高生殖传递效率的胚胎干（ES）细胞的优点。包括基因组信息的可用性以及将基因组基因片段整合到细菌人工染色体（BAC）中的文库的可用性。今年，我们将药物活性诱导的基因重组酶CrePR基因插入胃泌素释放肽（GRP）和LIM同源域蛋白7/8的基因组基因中，这些基因在外侧和内侧杏仁核中高度选择性表达。建立了小鼠品系和以 Cre 活性依赖性方式表达 NMDA 受体显性失活形式的小鼠品系。使用常规方法构建靶向基因重组载体（TV）需要使用限制性内切酶对基因组基因片段进行多次克隆和纯化步骤，既费力又耗时。另一方面，近年来，已经开发了使用与BAC同源的重组酶对大肠杆菌中的BAC进行遗传操作的方法。作为方法之一，我们对Counter-selection BAC修饰试剂盒（GENE BRIDGES）的耐药标记进行了修饰，并最终修饰了用于克隆基因组片段的TV序列，建立了在数月内创建TV的方法。这些修改使得制造电视变得更加容易，并且可用于制造各种电视，并且允许使用 BAC 进行系统的基因操作。我们目前正在将制作的TV转染到ES细胞中，以获得靶向转基因ES细胞。其中，获得了GRP-CrePR的同源重组ES克隆候选物。

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

グルタミン酸受容体チャンネルの構造と機能

谷氨酸受体通道的结构和功能

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
生化学(総説) 77
影响因子：
0
作者：
Kato Y;Takatsuki K;Kawahara S;Fukunaga S;Mori H;Mishina M;Kirino Y.;Takahashi Y.Mori H.Mishina M.Watanabe M.Konondo N.Shimomura J.Kubota Y.Matsuda K.Fukushima K.Shiroma N.Akasaka N.Nishida H.Imamura A.Watanabe H.Sugiyama N.Ikezawa M.Fujiwara T.;Takeuchi T.Miyazaki T.Watanabe M.Mori H.Sakimura K.Mishina M.;森寿
通讯作者：
森寿

NMDA receptors play important roles in acquisition and expression of the eyeblink conditioned response in glutamate receptor subunit δ2 mutant mice.

NMDA 受体在谷氨酸受体亚基 δ2 突变小鼠眨眼条件反应的获得和表达中发挥重要作用。