アストロサイト特異的遺伝子操作マウスの作製と脳機能解析

星形胶质细胞特异性基因工程小鼠的创建及脑功能分析

基本信息

批准号：
16047210
负责人：
森寿
金额：
$ 4.29万
依托单位：
University of Toyama (2005)Toyama Medical and Pharmaceutical University (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、脳のアストロサイト特異的かつ時期特異的遺伝子操作マウスを作成し、NMDA型グルタミン酸受容体の内在性リガンドと考えられているアストロサイト由来D-セリンによる神経伝達調節と脳機能における役割を、個体レベルで検証することを目的としている。この目的のために、アストロサイト特異的に発現しD-セリンの合成を担うセリンラセミ化酵素(SR)遺伝子を脳部位特異的かつ時期特異的に欠損させたマウスの作製を行った。まず、マウスSRゲノム遺伝子を含むバクテリア人工染色体(BAC)ベクターをバイオリソースより入手し、大腸菌内での相同遺伝子組換え法を改良、確立することにより、SRのタンパク質コード開始メチオニンに合わせ、薬剤投与により活性誘導が可能な遺伝子組換え酵素CrePR遺伝子を挿入した標的遺伝子組換えベクター(SRCP)を作製した。また、同じBACを用いて、SRの酵素機能に必須の領域をコードする第3エクソンの上流と下流のイントロン中にCrePRの認識配列であるloxPを導入し、かつ遺伝子欠損をモニターするためにloxP間の欠損により蛍光蛋白質EGFPを発現するようにした標的遺伝子組換えベクター(SRL)を構築した。これらのベクターをC57BL/6マウス系統由来ES細胞に導入し、標的遺伝子組換え細胞を取得し、次いでES細胞由来のキメラマウスを得た。SRCP系統では生殖系列伝達を確認しマウス系統が完成した。今後両系統のマウスを確立し、掛け合わせることにより、SRの脳機能における役割を分子生物学的、生理学的および行動学的観点から解析する予定である。

在这项研究中，我们创建了脑星形胶质细胞特异性和周期特异性基因工程小鼠，并研究了星形胶质细胞衍生的 D-丝氨酸（被认为是 NMDA 型谷氨酸受体的内源性配体）在神经传递调节和大脑中的作用。目的是在个人层面上验证这一点。为此，我们培育了小鼠，其中丝氨酸消旋酶（SR）基因以脑区域特异性和时期特异性的方式被删除，该基因在星形胶质细胞中特异性表达并负责 D-丝氨酸的合成。首先，我们从BioResources获得了含有小鼠SR基因组基因的细菌人工染色体（BAC）载体，通过在大肠杆菌中改进和建立同源基因重组方法，我们能够将SR的蛋氨酸起始的蛋白编码调整为We构建了靶基因重组载体（SRCP），其中插入了能够诱导活性的重组酶CrePR基因。此外，使用相同的BAC，将CrePR识别序列loxP引入到编码SR酶功能必需区域的第三外显子上游和下游的内含子中，并且利用loxP来监测基因缺陷。靶向基因重组载体 (SRL)，通过删除荧光蛋白 EGFP 来表达该蛋白。将这些载体导入C57BL/6小鼠品系来源的ES细胞中，获得目的基因重组细胞，进而获得ES细胞来源的嵌合小鼠。 SRCP品系中确认了种系传递，小鼠品系完成。未来，我们计划建立并杂交这两种小鼠品系，从分子生物学、生理学和行为学角度分析SR在脑功能中的作用。

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

NMDA receptors play important roles in acquisition and expression of the eyeblink conditioned response in glutamate receptor subunit δ2 mutant mice.

NMDA 受体在谷氨酸受体亚基 δ2 突变小鼠眨眼条件反应的获得和表达中发挥重要作用。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Neuroscience 135
影响因子：
0
作者：
Kato Y;Takatsuki K;Kawahara S;Fukunaga S;Mori H;Mishina M;Kirino Y.
通讯作者：
Kirino Y.

情動学習の神経機構

情绪学习的神经机制

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
神経研究の進歩(総説) 50
影响因子：
0
作者：
Ando;K.;Nagano;T.;Nakamura;A.;Konno;D.;Yagi;H.;Sato;M;森寿
通讯作者：
森寿

グルタミン酸受容体チャンネルの構造と機能

谷氨酸受体通道的结构和功能

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
生化学(総説) 77
影响因子：
0
作者：
Kato Y;Takatsuki K;Kawahara S;Fukunaga S;Mori H;Mishina M;Kirino Y.;Takahashi Y.Mori H.Mishina M.Watanabe M.Konondo N.Shimomura J.Kubota Y.Matsuda K.Fukushima K.Shiroma N.Akasaka N.Nishida H.Imamura A.Watanabe H.Sugiyama N.Ikezawa M.Fujiwara T.;Takeuchi T.Miyazaki T.Watanabe M.Mori H.Sakimura K.Mishina M.;森寿
通讯作者：
森寿

Behavioral adaptations to addictive drugs in mice lacking the NMDA receptor ε1 subunit.

缺乏 NMDA 受体 ε1 亚基的小鼠对成瘾药物的行为适应。