アストロサイト特異的遺伝子操作マウスの作製と脳機能解析

星形胶质细胞特异性基因工程小鼠的创建及脑功能分析

基本信息

批准号：
16047210
负责人：
森寿
金额：
$ 4.29万
依托单位：
University of Toyama (2005)Toyama Medical and Pharmaceutical University (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、脳のアストロサイト特異的かつ時期特異的遺伝子操作マウスを作成し、NMDA型グルタミン酸受容体の内在性リガンドと考えられているアストロサイト由来D-セリンによる神経伝達調節と脳機能における役割を、個体レベルで検証することを目的としている。この目的のために、アストロサイト特異的に発現しD-セリンの合成を担うセリンラセミ化酵素(SR)遺伝子を脳部位特異的かつ時期特異的に欠損させたマウスの作製を行った。まず、マウスSRゲノム遺伝子を含むバクテリア人工染色体(BAC)ベクターをバイオリソースより入手し、大腸菌内での相同遺伝子組換え法を改良、確立することにより、SRのタンパク質コード開始メチオニンに合わせ、薬剤投与により活性誘導が可能な遺伝子組換え酵素CrePR遺伝子を挿入した標的遺伝子組換えベクター(SRCP)を作製した。また、同じBACを用いて、SRの酵素機能に必須の領域をコードする第3エクソンの上流と下流のイントロン中にCrePRの認識配列であるloxPを導入し、かつ遺伝子欠損をモニターするためにloxP間の欠損により蛍光蛋白質EGFPを発現するようにした標的遺伝子組換えベクター(SRL)を構築した。これらのベクターをC57BL/6マウス系統由来ES細胞に導入し、標的遺伝子組換え細胞を取得し、次いでES細胞由来のキメラマウスを得た。SRCP系統では生殖系列伝達を確認しマウス系統が完成した。今後両系統のマウスを確立し、掛け合わせることにより、SRの脳機能における役割を分子生物学的、生理学的および行動学的観点から解析する予定である。

这项研究旨在创建大脑星形胶质细胞特异性和特异性的基因工程小鼠，并通过星形胶质细胞衍生的D丝氨酸来验证神经传递调节和大脑功能的作用，这被认为是NMDA型谷氨酸受体的内源性配体。为此，制备了小鼠，其中丝氨酸种族化酶（SR）基因（特异性的星形胶质细胞表达，负责D-丝氨酸的合成），在大脑位点特异性方面缺乏，并且以特定时间为特定的方式不足。首先，从生物库中获得了包含小鼠SR基因组基因的细菌性人造染色体（BAC）载体，并通过改进和建立大肠杆菌中的同源重组方法，从而创建了靶重组载体（SRCP），可以通过该剂量诱导的酶crepr基因，并将其构成，并在其中诱导的药物，该基因被构成，该基因被构成，该基因的构成，该材料被构成，该杂音构成的概念是，该媒介是由药物组合而成的。 SR。 Furthermore, using the same BAC, a target genetically modified vector (SRL) was constructed in which the recognition sequence of CrePR was introduced into the introns upstream and downstream of the third exon, which encodes a region essential for the enzyme function of the SR, and in order to monitor gene deficiency, a target gene recombinant vector (SRL) was constructed to express the fluorescent protein EGFP due在Loxps之间缺乏。这些载体被引入源自C57BL/6小鼠菌株的ES细胞中，并获得了靶向遗传修饰的细胞，然后是源自ES细胞的嵌合小鼠。 SRCP线确认的种系传输和小鼠谱系已完成。将来，我们计划建立和乘以两种菌株的小鼠，以从分子生物学，生理和行为的角度分析SR在脑功能中的作用。

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

NMDA receptors play important roles in acquisition and expression of the eyeblink conditioned response in glutamate receptor subunit δ2 mutant mice.

NMDA 受体在谷氨酸受体亚基 δ2 突变小鼠眨眼条件反应的获得和表达中发挥重要作用。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Neuroscience 135
影响因子：
0
作者：
Kato Y;Takatsuki K;Kawahara S;Fukunaga S;Mori H;Mishina M;Kirino Y.
通讯作者：
Kirino Y.

情動学習の神経機構

情绪学习的神经机制

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
神経研究の進歩(総説) 50
影响因子：
0
作者：
Ando;K.;Nagano;T.;Nakamura;A.;Konno;D.;Yagi;H.;Sato;M;森寿
通讯作者：
森寿

グルタミン酸受容体チャンネルの構造と機能

谷氨酸受体通道的结构和功能

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
生化学(総説) 77
影响因子：
0
作者：
Kato Y;Takatsuki K;Kawahara S;Fukunaga S;Mori H;Mishina M;Kirino Y.;Takahashi Y.Mori H.Mishina M.Watanabe M.Konondo N.Shimomura J.Kubota Y.Matsuda K.Fukushima K.Shiroma N.Akasaka N.Nishida H.Imamura A.Watanabe H.Sugiyama N.Ikezawa M.Fujiwara T.;Takeuchi T.Miyazaki T.Watanabe M.Mori H.Sakimura K.Mishina M.;森寿
通讯作者：
森寿

Behavioral adaptations to addictive drugs in mice lacking the NMDA receptor ε1 subunit.

缺乏 NMDA 受体 ε1 亚基的小鼠对成瘾药物的行为适应。