リンパ球腫瘍化にかかわるインターフェロン系転写因子IRF-4を標的とした創薬研究

针对 IRF-4（一种参与淋巴细胞肿瘤发生的干扰素转录因子）的药物发现研究

基本信息

批准号：
17016057
负责人：
松山俊文
金额：
$ 4.99万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17016057/
关键词：
インターフェロン IRF-4 創薬スクリーニング生理活性物質

项目摘要

インターフェロン制御因子-4(IRF-4)はIRFファミリーに属する転写因子であり、IRFに共通するDNA結合領域を通じてISREとよばれる配列に結合する。申請者はランダムオリゴマーを用いたIRF-4の至適結合配列の検索を通じて、ISREの配列によってはIRF-4とIRF-1は拮抗する関係にあることを見出した。IRF-4の結合の至適配列(ISRE-SAAB1)をプロモータにもつ遺伝子においてIRF-4はIRF-1による転写活性化を効果的に阻害する。そこからISRE-SAAB1の下流につないだレポーター活性の回復を指標としてIRF-4の阻害物質を(財)微生物化学研究会微生物化学研究センターと連携して微生物生理活性物質の中から見出すことを目標として開始した。実施に当たっては、HeLa細胞を用い、陽性コントロールとしてIRF-1cDNA単独導入を、そこにIRF-4の阻害効果が現れるものとしてIRF-1,IRF-4cDNA同時導入をおこなった。微生物生理活性物質の効果の判定はレポーター遺伝子の回復を指標とした。放線菌を中心とした土壌細菌を各種分離培地で1ヶ月に約120株以上を分離選別し2-3種の生産培地を用いることで現在までに1435検体のスクリーニングを行ってきた。その結果、IRF-4の中等度の阻害活性を示した12サンプルを得た。そのうちの1サンプルについてはHPLCを3回繰り返すことで活性のあるピークを得て、その同定作業が現在進行中である。一方で、より強い活性のあるサンプルの探索のために更に検体を増やしてスクリーニングを行っている。

干扰素调节因子 4 (IRF-4) 是一种属于 IRF 家族的转录因子，通过 IRF 共有的 DNA 结合区与称为 ISRE 的序列结合。通过使用随机寡聚物寻找IRF-4的最佳结合序列，申请人发现IRF-4和IRF-1根据ISRE序列具有竞争关系。 IRF-4 可有效抑制启动子为最佳 IRF-4 结合序列 (ISRE-SAAB1) 的基因中 IRF-1 的转录激活。以此为基础，我们的目标是与微生物化学研究会微生物化学研究中心合作，以ISRE-SAAB1下游相关报告活性的恢复为指标，从微生物的生理活性物质中寻找IRF-4的抑制剂。开始是。在进行实验时，使用HeLa细胞，单独引入IRF-1 cDNA作为阳性对照，并且由于IRF-4抑制作用而同时引入IRF-1和IRF-4 cDNA。以报告基因的回收率作为判断微生物生物活性物质效果的指标。我们每月使用各种分离培养基分离筛选了120多株土壤细菌，主要是放线菌，迄今已使用2-3种生产培养基筛选了1435份标本。结果，获得了12个显示出中等IRF-4抑制活性的样品。对于其中一个样品，通过重复 HPLC 3 次获得了活性峰，目前正在进行鉴定工作。另一方面，为了寻找活性更强的样本，我们正在增加样本数量并进行筛选。