リンパ球腫瘍化に関わるインターフェロン系転写因子IRF-4を標的とした創薬研究

针对 IRF-4（一种参与淋巴细胞肿瘤发生的干扰素转录因子）的药物发现研究

基本信息

批准号：
20015036
负责人：
松山俊文
金额：
$ 6.66万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

インターフェロン制御因子-4(IRF-4)はIRFファミリーに属する転写因子であり、免疫担当細胞特異的に発現誘導され、細胞増殖に対して正の方向に働く癌遺伝子としての性格を有する。申請者らはISREの配列(ISRE-SAAB1)においてIRF-1は転写を活性化し、IRF-4はその活性を抑制することを見出した。そこでIRF-4阻害物質の探索をISRE-SAAB1の下流につないだレポーター活性の回復を指標として(財)微生物化学研究会微生物化学研究センターと連携して開始した。現在までに放線菌由来生理活性化物質でIRF-4を効果的に抑制する物質は見つかっていないが、申請者らはATLL細胞は、TARIL受容体のR1, R2が発現しているもののTRAILに対して抵抗性であることに注目しTRAILと放線菌由来生理活性化物質の併用でATLL細胞特異的に作用する物資のスクリーニングを開始した。使用した細胞株はATLL患者より樹立されたもので臨床検体に近い細胞である。現在までに7344検体をスクリーニングし、293検体を2次スクリーニングに、さらに120検体を3次スクリーニングにかけた結果、TRAILと相互作用してATLL細胞特異的に毒性を表すものとして5検体を見出した。それらについて、HPLC、溶剤抽出試験などで作用物質の精製を行い、4つの陽性分画を得て物質同定を進めている。更にATLL細胞の生存に重要なNF-kappaB阻害物質のスクリーニングも並行して行い、5800検体中1検体に強力な活性を見出しその同定を進めているところである。また同時にATLL細胞株特異的に作用する物質のスクリーニングも行ってきたが、対照として用いていたJurkat細胞特異的に作用するがATLL細胞株には作用しない2検体を見出しそれらの同定を進めているところである。本因子が同定できれば逆に何故ATLL細胞が耐性であるかについて解析できることから大きな展開が期待できる。

干扰素调节因子-4（IRF-4）是属于IRF家族的转录因子，其表达在免疫活性细胞中被特异性诱导，并具有对细胞增殖产生积极作用的癌基因的特征。申请人发现，在ISRE序列(ISRE-SAAB1)中，IRF-1激活转录，而IRF-4抑制该活性。因此，我们开始与日本微生物化学学会微生物化学研究中心合作，以ISRE-SAAB1下游报告基因活性的恢复为指标，开始寻找IRF-4抑制剂。迄今为止，尚未发现有效抑制IRF-4的放线菌来源的生理活性物质，但申请人报道ATLL细胞表达TARIL受体R1和R2但对TRAIL不敏感，并注意到ATLL细胞对ATLL细胞具有抗性。我们开始使用 TRAIL 和放线菌衍生的生理活性物质的组合来筛选专门作用于 ATLL 细胞的物质。使用的细胞系是从 ATLL 患者建立的，接近临床样本。迄今为止，已筛选了 7,344 个样品，对 293 个样品进行了二次筛选，对 120 个样品进行了三级筛选，结果发现 5 个样品与 TRAIL 相互作用并表现出 ATLL 细胞特异性毒性。我们采用HPLC、溶剂萃取试验等方法对活性物质进行纯化，获得4个阳性组分，正在进行物质鉴定。此外，我们还对 NF-kappaB 抑制剂进行平行筛选，该抑制剂对于 ATLL 细胞的存活很重要，目前正在鉴定 5,800 个样本中的 1 个具有强活性。同时，我们一直在筛选专门作用于 ATLL 细胞系的物质，目前我们正在鉴定两个专门作用于用作对照的 Jurkat 细胞的样品，但顺便说一下，它们对 ATLL 细胞系不起作用。如果能够识别这个因素，就有可能分析 ATLL 细胞为何具有耐药性，这可能会带来重大进展。