EGFR変異遺伝子導入による薬剤耐性非小細胞肺癌の高感受性変化

EGFR突变基因引入导致耐药非小细胞肺癌高易感性变化

基本信息

批准号：
17015004
负责人：
前門戸任
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17015004/
关键词：
EGFR 遺伝子変異アデノウイルス SLPI

项目摘要

Gefitinib感受性患者のEGFRに特定変異が認められ、その遺伝子変異がEGFRのGefitinibへの感受性亢進につながることが報告された。本研究はこの変異型EGFR遺伝子をGefitinib耐性非小細胞肺癌に特異的プロモーターを用いて導入しGefitinib治療効果の増強を目的とした。まず、作製したアデノウイルスを投与するモデルマウスの作製より行った。Exon19の欠失型のアデノウイルスだけでなく点突然変異型のL858R型の変異EGFR遺伝子をコードするアデノウイルスを作製するために、野生型EGFRに点突然変異を誘発する手法を用い現在進行中である。また、今回アデノウイルスのプロモーターとして用いるのが非小細胞肺癌に強力に発現するSLPIプロモーターであるが、EGFR遺伝子変異をもつ細胞株のSLPI分泌を測定すると変異のない肺癌細胞株の10倍に及ぶ発減量の増加が認められる。EGFR遺伝子変異のない細胞株にAdSLPI.変異型EGFRを感染させるとSLPIの転写活性が上がりmEGFR蛋白の発現量の増幅が期待される。一方、ベクターの作製に平行して肺癌細胞株を経静脈的に投与し肺にのみ肺癌細胞株を生着させ細気管支肺胞上皮癌に似る肺癌モデルの作製に成功した。ヌードマウスの経静脈より2x10^6個のヒト肺癌細胞株を投与し観察したところ10週後より肺野にびまん性の腫瘍細胞の浸潤が認められるようになった。腫瘍細胞は肺胞を置換するように存在し細気管支肺胞上皮癌の進展形式に一致する。In vivo実験の陽性コントロールに用いることが出来る。また同様の実験モデルをEGFR変異のないH358細胞株で作製中であり、今後このモデルマウスを用いて変異EGFRアデノウイルスを投与する予定である。

据报道，在对吉非替尼敏感的患者中观察到EGFR的特异性突变，这种基因突变导致EGFR对吉非替尼的敏感性增加。本研究的目的是利用特定的启动子将这种突变的EGFR基因引入吉非替尼耐药的非小细胞肺癌中，以增强吉非替尼的治疗效果。首先，我们创建了一只模型小鼠，并对其施用了所创建的腺病毒。为了不仅创建外显子19缺失的腺病毒，而且还创建编码点突变L858R突变型EGFR基因的腺病毒，我们目前正在使用一种在野生型EGFR中诱导点突变的方法。另外，这次使用的腺病毒启动子是SLPI启动子，它在非小细胞肺癌中强烈表达，但在EGFR基因突变的细胞系中测量SLPI分泌量时，是肺癌的10倍观察到没有突变的细胞系的发育量增加。当没有EGFR基因突变的细胞系被AdSLPI.mutant EGFR感染时，SLPI的转录活性增加，mEGFR蛋白的表达水平预计会放大。另一方面，在生产载体的同时，静脉注射肺癌细胞系，并将肺癌细胞系仅移植到肺部，成功创建了类似于细支气管肺泡上皮癌的肺癌模型。将2x10^6人肺癌细胞系静脉给予裸鼠观察，10周后肺野可见弥漫性肿瘤细胞浸润。肿瘤细胞似乎取代了肺泡，这与细支气管肺泡上皮癌的晚期形式一致。可作为体内实验的阳性对照。我们还使用没有 EGFR 突变的 H358 细胞系创建类似的实验模型，并计划使用该模型小鼠来施用突变 EGFR 腺病毒。