脂質滴局在Rab蛋白質による膜トラフィック制御

通过脂滴定位的 Rab 蛋白控制膜交通

基本信息

批准号：
16044220
负责人：
藤本豊士
金额：
$ 3.9万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16044220/
关键词：
脂質滴 Rab18 ADRP 小胞体

项目摘要

脂質滴は哺乳類の細胞に普遍的に見られ,おもにトリグリセリドとコレステロールエステルからなるコアが中央部分にあり,周辺をコレステロールを含む燐脂質一重層からなる表層が覆う構造である.脂質滴表層にはADRP, TIP47の他,我々が昨年度までの研究で同定したRab18などが局在し,細胞内脂質動態に関与することが明らかになってきた.肝細胞のリポ蛋白質形成過程では,脂質滴に由来する脂質がApoBに付加され,過剰なApoBは複数の経路で分解されることが知られている.肝由来のHuh7細胞では,脂質滴を三日月状に囲むApoB(ApoB-crescent)が〜10%の細胞に観察された.ApoB-crescentはプロテアソーム阻害で増加し,12時間後には約50%に達した.脂質滴画分にはApoB,プロテアソーム,ポリユビキチン,ポリユビキチン化ApoBが見られ,プロテア・ソーム阻害で増加した.免疫電顕によりApoB-crescentは脂質滴に近接した脂質性顆粒の集積であることが分かった.プロテアソーム阻害ではリソゾーム内ApoBおよびLC3も増加し,LC3の一部はApoB-crescentに近接していた.ApoB-crescentはプロテアソーム阻害24時間後には急減したが,3-MAでオートファジーを同時に阻害するとこの減少は見られなかった.また3-MAのみでも,投与時間依存的にApoB-crescentが誘導された.これらの結果は,脂質滴表層は分解を受けるApoBが貯留する場であること,貯留したApoBはプロテアソーム系,オートファゴソーム/リソゾーム系の両方によって分解を受けることを示す.

脂质液滴在哺乳动物细胞中普遍发现，核心主要由甘油三酸酯和胆固醇酯组成，中心部分由含有胆固醇的磷脂单层组成的表面层。脂质液滴的表面层是ADRP，除了tip47，rab18和去年研究中确定的其他材料外，还局部局部，并参与细胞内脂质动力学。在肝细胞的脂蛋白形成过程中，将源自脂质液滴衍生的脂质添加到APOB中，并通过多种途径降解了多余的APOB。在肝来源的HuH7细胞中，在约10％的细胞中观察到了被脂质液滴包围的APOB（APOB-胶状）。 Apob-Crescent通过蛋白酶体抑制增加，并在12小时后达到约50％。发现脂质液滴级分包含APOB，蛋白酶体，多泛素和多泛素化的APOB，通过蛋白酶体抑制增加了脂肪液。免疫体电子显微镜。发现POB染色是脂质颗粒与脂质液滴接近的积累。蛋白酶体抑制也增加了肌体内APOB和LC3，LC3的一部分接近Apob-Crescent。蛋白酶体抑制后24小时，Apob胶水突然减少，但是当自噬同时在3 ma时抑制自噬时，没有看到这种减少。此外，仅在3-MA中以时间依赖的方式诱导Apob-Crescent。这些结果表明，脂质液滴的表面是储存降解的APOB的位点，并且储存的APOB被蛋白酶体和自噬体/溶酶体系统降解。