脂質滴局在分子による脂質動態制御と細胞膜ミクロドメイン

脂滴定位分子对脂质动力学和细胞膜微区的控制

基本信息

批准号：
16022230
负责人：
藤本豊士
金额：
$ 3.14万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16022230/
关键词：
脂質滴 Rab18 ADRP 膜ミクロドメイン

项目摘要

脂質滴はほとんどの細胞に見られる構造であり,コレステロールエステルなどの中性脂質が集積する.脂質滴は膜脂質組成の調節に関係し,それにより膜ミクロドメインの構造やそこでのシグナル伝達制御にも関わると考えられる.脂質滴機能を明らかにする目的で,脂質滴成分を網羅的に解析し,新たな脂質滴蛋白質を同定した.今年度はRab18について解析した.抗Rab18抗体による標識,EGFP-Rab18の観察より,Rab18が脂質滴に特異的に局在することを確認した.脂質滴マーカーであるADRPとの二重標識により,両者は脂質滴表層に共存するが,その標識強度は相補的であった.EGFP-Rab18を強制発現させると,導入分子が発現した脂質滴でのみADRPの標識強度が低下し,Rab18はADRPを排除することが示された.EGFP-Rab18を発現した細胞を電顕観察すると,小胞体またはその延長部分が脂質滴と密着する構造が高頻度で観察された.ADRPをRNA干渉法で発現抑制した細胞,およびBrefeldin A処理でADRPを脂質滴表層から脱落させた細胞でも同様の密着構造が見られ,いずれの場合も対照群に比較して有意の差が認められた.これらの結果はGTP結合蛋白質であるRab18が脂質滴表層に結合する性質を持ち,さらにADRPを排除することで小胞体と脂質滴の密着構造形成を誘導することを示す.小胞体との密着構造はミトコンドリアや細胞膜でも観察され,いずれも膜間の脂質移動に関係すると考えられている.Rab18が誘導した小胞体・脂質滴間の密着構造についても同様の機能を持つと推測され,その結果として膜ミクロドメインに影響を与える可能性が考えられる.

脂滴是在大多数细胞中发现的结构，它们积累中性脂质，例如胆固醇酯。脂滴参与调节膜脂质组成，从而控制膜微区的结构和其中的信号转导。。为了弄清楚这一点，我们全面分析了脂滴成分，鉴定了新的脂滴蛋白。今年，我们分析了Rab18。从抗Rab18抗体的标记和EGFP-Rab18的观察，我们发现Rab18是一种脂滴证实其特异性定位于。通过与脂滴标记ADRP的双重标记，两者共存于脂滴的表面层，但它们的标记强度是互补的，当EGFP-Rab18被强制表达时，在表达的脂质中检测到引入的分子。 ADRP 强度仅下降，Rab18表达 EGFP-Rab18 的细胞的电子显微镜显示，内质网或其延伸与表达被 Brefeldin 抑制的细胞紧密接触。在通过A处理从脂滴表面层去除ADRP的细胞中观察到类似的粘附结构，并且在每种情况下，与具有与A的表面层结合的性质的对照组相比，观察到显着差异。脂滴，此外，通过消除ADRP，诱导内质网和脂滴之间形成紧密接触结构。在线粒体和细胞膜中也观察到与内质网的紧密接触结构，并且两者被认为与膜间的脂质转移有关。Rab18诱导的内质网与脂滴之间的紧密接触结构也是如此。因此，人们认为它可能对膜微区有影响。