脂質滴局在分子による脂質動態制御と細胞膜ミクロドメイン

脂滴定位分子对脂质动力学和细胞膜微区的控制

基本信息

批准号：
16022230
负责人：
藤本豊士
金额：
$ 3.14万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16022230/
关键词：
脂質滴 Rab18 ADRP 膜ミクロドメイン

项目摘要

脂質滴はほとんどの細胞に見られる構造であり,コレステロールエステルなどの中性脂質が集積する.脂質滴は膜脂質組成の調節に関係し,それにより膜ミクロドメインの構造やそこでのシグナル伝達制御にも関わると考えられる.脂質滴機能を明らかにする目的で,脂質滴成分を網羅的に解析し,新たな脂質滴蛋白質を同定した.今年度はRab18について解析した.抗Rab18抗体による標識,EGFP-Rab18の観察より,Rab18が脂質滴に特異的に局在することを確認した.脂質滴マーカーであるADRPとの二重標識により,両者は脂質滴表層に共存するが,その標識強度は相補的であった.EGFP-Rab18を強制発現させると,導入分子が発現した脂質滴でのみADRPの標識強度が低下し,Rab18はADRPを排除することが示された.EGFP-Rab18を発現した細胞を電顕観察すると,小胞体またはその延長部分が脂質滴と密着する構造が高頻度で観察された.ADRPをRNA干渉法で発現抑制した細胞,およびBrefeldin A処理でADRPを脂質滴表層から脱落させた細胞でも同様の密着構造が見られ,いずれの場合も対照群に比較して有意の差が認められた.これらの結果はGTP結合蛋白質であるRab18が脂質滴表層に結合する性質を持ち,さらにADRPを排除することで小胞体と脂質滴の密着構造形成を誘導することを示す.小胞体との密着構造はミトコンドリアや細胞膜でも観察され,いずれも膜間の脂質移動に関係すると考えられている.Rab18が誘導した小胞体・脂質滴間の密着構造についても同様の機能を持つと推測され,その結果として膜ミクロドメインに影響を与える可能性が考えられる.

脂质液滴是在大多数细胞中发现的结构，中性脂质（如胆固醇酯）积累。脂质液滴参与膜脂质组成的调节，并被认为参与了膜微区和信号控制的结构。为了阐明脂质液滴的功能，我们全面分析了脂质液滴成分并鉴定了新的脂质液滴蛋白。今年，我们分析了RAB18。从用抗RAB18抗体标记的EGFP-RAB18的观察，我们证实了RAB18专门定位于脂质液滴。使用ADRP（脂质液滴标记）的双重标记，都在脂质液滴的表面共存，但标记强度是互补的。当EGFP-RAB18被迫表达ADRP时，仅在引入的分子表达的脂质液滴中降低了ADRP的标记强度，并且显示RAB18可消除ADRP。当在电子显微镜中观察到表达EGFP-RAB18的细胞时，在高频率下观察到内质网或其延伸部分紧密粘附到脂质液滴时。在治疗A期间从脂质下降表面去除ADRP的细胞中，观察到通过RNA干扰法抑制ADRP表达的细胞，并且在两种情况下，与对照组相比都有显着差异。这些结果表明，GTP结合蛋白Rab18具有与脂质滴表面结合的特性，并且通过消除ADRP，它诱导内质网和脂质液滴之间的粘附结构的形成。在线粒体和细胞膜中还观察到内质网和脂质液滴之间的粘附结构，并且两者都被认为与膜之间的脂质运动有关。据估计，RAB18诱导的内质网和脂质液滴之间的粘附结构具有相同的功能，并且结果可能会影响膜微域。