膜ドメインとしての脂質滴に関する研究

脂滴作为膜域的研究

基本信息

批准号：
14028028
负责人：
藤本豊士
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028028/
关键词：
脂質滴 ADRP 欠失ミュータント

项目摘要

脂質滴は全ての細胞に存在する構造である.内部はコレステロールエステルとトリグリセリドが様々な比率で存在し,表層はフリーコレステロールを含む燐脂質一重層で形成されている(Tauchi-Sato et al., J.Biol.Chem.,277:44507-44512,2002).脂質滴は細胞内コレステロール濃度調節に関わり,形質膜のコレステロール濃度を通じてシグナル伝達に影響を与えると考えられている.しかし脂質滴に蓄えられる脂質量の調節機構は明らかでない.さらに脂質滴表層は特異な脂質組成を持つ膜領域とであり,シグナル伝達に関連する種々の機能分子が集中している可能性があるが,脂質滴を構成する分子についての知見は乏しい.我々は上記2つの観点から脂質滴の機能を解明するため,(1)脂質滴特異的な蛋白質であるADRPについて検索し,また(2)脂質滴蛋白質の網羅的解析を行った.ADRPの欠失ミュータントの解析により,ADRPの脂質滴へのターゲッティングはN末の181アミノ酸またはC末の150アミノ酸のいずれかで足りることが明らかになった.両者に重複する領域はなく,また両者とも全長のADRPと同様に新たな脂質滴形成を誘導した.さらにADRPの超微局在を凍結レプリカ標識法で検索すると,単一のエピトープが脂質滴表層の凸面,凹面,さらに中央を横断する割断面のいずれにも認められた.これらの結果はADRPが多くの膜分子と異なる性質を持ち,脂質滴の調節に関わることを示唆する.一方,精製脂質滴画分の質量分析法による解析を行ったところ,ADRPや中性脂質代謝に関わる複数の酵素などの他,多数の機能既知・未知の蛋白質が存在することが判明した.この結果は脂質滴の新たな機能を示唆するものであり,生化学的方法と遺伝子導入・ノックダウンによる機能解析を進めている.

脂滴是存在于所有细胞中的结构。内部含有不同比例的胆固醇酯和甘油三酯，表层由含有游离胆固醇的单层磷脂形成（Tauchi-Sato等， J. Biol. Chem.，277：44507-44512，2002）。脂滴参与细胞内胆固醇浓度的调节，并且被认为通过质膜中的胆固醇浓度影响信号转导。此外，脂滴表层是具有独特脂质成分的膜区域，涉及多种与信号转导相关的机制。然而，对于构成脂滴的分子知之甚少。为了从上述两个角度阐明脂滴的功能，我们研究了（1）脂滴特异性蛋白；很明显，C 末端的 150 个氨基酸中的任何一个都是足够的。两者之间没有重叠区域，并且都以与全长 ADRP 相同的方式诱导新的脂滴形成。此外，ADRP 的超微定位当使用冷冻复制标记方法寻找脂滴的存在时，在脂滴表面的凸面和凹面以及穿过中心的断裂面上发现了单个表位。另一方面，通过质谱分析纯化的脂滴组分表明，检测到了ADRP和多种参与中性脂质代谢的酶，发现有许多具有已知和未知功能的蛋白质。这一结果表明了ADRP的新功能。脂滴，我们正在使用生化方法和基因导入/敲除进行功能分析。