新規クラスE小胞輸送蛋白質による抗原提示機能制御

新型 E 类囊泡转运蛋白对抗原呈递功能的调节

基本信息

批准号：
16043202
负责人：
田中伸幸
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16043202/
关键词：
抗原提示 MHCクラスII CIIV MHCクラスI オルガネラ貪食

项目摘要

ESCRT-0に分類される小胞輸送関連蛋白質STAM1,STAM2 (STAMs)による抗原提示における役割を明らかにする目的で、コンディショナルSTAM1/2ダブル欠損マウスを用いた抗原提示細胞機能解析、および抗原のプロセシングを対象とした小胞輸送解析を行った。マクロファージおよび樹状細胞(DC)特異的にCreリコンビナーゼを発現するLysM-Creマウスと上記コンディショナルダブル欠損マウスの交配を行ったところ、DCにおいて両分子がほぼ完全に消失することがサザンおよびウエスタンブロット法により確認された。同マウスより骨髄細胞からGM-CSF存在下にDCを調整した。STAM欠損DCについてFACS解析したところMHCクラスIIおよびクラスIの発現がimmatureDCにおいても増強していた。クラスIIの発現は野生型においてはLPSによる成熟シグナルによって速やかに誘導されたが、STAM欠損DCにおいて誘導は軽微であった。共焦点顕微鏡を用いた細胞内オルガネラ観察を行ったところ、野生型未成熟DCにおいてはMHCクラスII細胞内小胞(CIIV)に蓄積しており、ライソゾームマーカーであるLAMP1とmergeしていた。一方、欠損未成熟DCにおいてはMHCクラスIIの細胞内小胞への蓄積が著明に減少し細胞表面に移行していた。以上の結果からSTAMsはMHCクラスIIの細胞内小胞への蓄積に重要な働きをしていることが判明した。DCの抗原提示能を検討する目的でOVAを貪食させOT-II由来T細胞へのクラスII依存性抗原提示を検討した。その結果、STAMs欠損において抗原提示能の著明な亢進が認められた。DCは細胞内小胞にクラスIIを蓄積し成熟シグナルに即座に対応して抗原提示する特性があることから、今後小胞輸送との関連をさらに検討することでDC機能の解明が期待される。

为了阐明被归类为ESCRT-0的囊泡转运相关蛋白STAM1和STAM2（STAM）在抗原呈递中的作用，我们使用条件STAM1/2双缺陷小鼠进行了抗原呈递细胞功能分析，我们进行了针对处理的囊泡运输分析。当在巨噬细胞和树突状细胞（DC）中特异性表达 Cre 重组酶的 LysM-Cre 小鼠与上述条件双缺陷小鼠杂交时，如 Southern 和 Western blotting 所证实，两种分子在 DC 中几乎完全消失。法律。在 GM-CSF 存在的情况下，从同一只小鼠的骨髓细胞中制备 DC。对 STAM 缺陷 DC 的 FACS 分析显示，即使在未成熟的 DC 中，MHC II 类和 I 类表达也有所增强。在野生型 DC 中，LPS 诱导的成熟信号可快速诱导 II 类表达，但在 STAM 缺陷的 DC 中，诱导程度较轻。使用共聚焦显微镜观察细胞内细胞器发现，在野生型未成熟DC中，它积累在MHC II类细胞内囊泡（CIIV）中，并与溶酶体标记物LAMP1融合。另一方面，在缺陷的未成熟DC中，细胞内囊泡中MHC II类的积累显着减少并转移到细胞表面。上述结果表明STAMs在细胞内囊泡中MHC II类积累中发挥重要作用。为了检查 DC 的抗原呈递能力，我们吞噬 OVA 并检查对 OT-II 衍生 T 细胞的 II 类依赖性抗原呈递。结果，在 STAM 缺陷小鼠中观察到抗原呈递能力显着增加。由于 DC 具有在细胞内囊泡中积累 II 类物质并响应成熟信号呈递抗原的特性，因此进一步研究与囊泡运输的关系有望阐明 DC 的功能。