人工“グリコウイルス"ベクターの開発と遺伝子治療への応用

人工“糖病毒”载体的开发及其在基因治疗中的应用

基本信息

批准号：
16023230
负责人：
青山安宏
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)エンドサイトーシスのサイズ依存性:グリコウイルスや量子ドット誘導体を含む種々の糖被覆サイズマーカーを合成し、エンドサイトーシスを経由する細胞取り込みの最適サイズが約50nmの"ウイルスサイズ"であることを明らかにした。(2)肝細胞への遺伝子ターゲティング:部分的(8残基のうち3個)にガラクトース置換した単量体(〜40nm)のグリコウイルスが肝細胞(HepG2)への遺伝子運搬において高い活性と選択性を併せ持つこと、およびin vivo(マウス尾静脈注射)でも活性であることが明らかになった。(3)サイズ制御に基づく制癌剤の活性向上:グリコクラスター化合物とリン酸イオンとの特異的な相互作用を利用することにより複合体のサイズをエンドサイトーシスに最適の50nm領域に制御することができる。これを用い、例えばイバンドロネートなどのビスリン酸系制癌剤の活性(細胞死滅活性)を著しく増強させることに成功した。(4)siRNAの運搬:グリコクラスター化合物がプラスミドDNAのみならず、siRNAの運搬体としても非常に有用であることをレポータージーンの発現抑制効果から明らかにした。(5)遺伝子の増幅診断:特定の遺伝子の存在により特定のタンパク質を発現するリボレギュレーターシステムを考案し、これにより細胞内に適用できる非PCR遺伝子増幅診断法を開発した。

(1)内吞作用的尺寸依赖性：我们合成了包括糖病毒和量子点衍生物在内的各种糖衣尺寸标记，并发现通过内吞作用进行细胞摄取的最佳尺寸是大约50 nm的“病毒尺寸”。 (2) 肝细胞基因靶向：具有部分半乳糖取代（8个残基中的3个）的单体（~40 nm）糖病毒在基因递送至肝细胞（HepG2）方面具有高活性和选择性。据揭示，该药物具有两种性别。并且在体内也具有活性（小鼠尾静脉注射）。 (3)基于尺寸控制来提高抗癌药物的活性：利用糖簇化合物与磷酸根离子之间的特异性相互作用，可以将复合物的尺寸控制在适合内吞作用的50 nm区域。利用这一点，我们成功地显着增强了伊班膦酸等二磷酸盐抗癌药物的活性（细胞杀伤活性）。 (4) siRNA的运输：我们发现糖簇化合物不仅作为质粒DNA的载体而且作为siRNA的载体非常有用，基于它们对抑制报告基因表达的作用。 (5)基因扩增诊断：我们设计了根据特定基因的存在而表达特定蛋白质的核糖调节系统，并开发了可应用于细胞内的非PCR基因扩增诊断方法。