レドックス制御と細胞がん化の情報伝達

细胞癌变的氧化还原控制和信息传递

基本信息

批准号：
16022217
负责人：
三木裕明
金额：
$ 4.1万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16022217/
关键词：
Wnt Dishevelled beta-catenin レドックス制御

项目摘要

Wntシグナルの伝達因子Dishevelled(Dvl)に結合する蛋白として見付けたNucleoredoxin(NRX)を強制発現することによってDvl依存性のβ-catenin安定化が阻害される。しかしWntシグナルはβ-catenin安定化以外にも、RhoやJNKを活性化して細胞の極性制御に関連していることが知られている。この経路へのNRXの効果を検討するため、Dvlによって誘導されるJNKの活性化に対する影響を調べたところ、NRXはJNKの活性化に対して正にも負にも全く影響しないことが明らかとなった。この実験結果より、NRXはWntシグナルの中でもβ-catenin安定化に至るシグナル経路のみを選択的に阻害していることが判明した。次にNRXがβ-catenin安定化を阻害する分子メカニズムについての検討を行った。DvlはFrat/GBPという蛋白を介してβ-catenin安定化を導くことが示唆されている。精製した蛋白を用いてin vitroで結合実験を行ったところ、これらが互いに競合していることを確認できた。また、細胞レベルにおいてもNRXとFrat/GBPが競合していることを示す実験結果が得られた。このようにNRXはFrat/GBPをDvlから排除することで、β-catenin安定化を阻害していることが示唆された。ところで、細胞で強制発現させたNRXは核内に集積するという報告がなされている。私は細胞の溶解物を核と細胞質に生化学的に分画して、内在性のNRXを特異的に認識できる抗体でウエスタン解析を行った。その結果、内在性のNRXは核には殆ど存在せず、細胞質に多く存在していることが明らかとなった。NRXの結合標的であるDvlは通常細胞質に存在していることが知られており、NRXとDvlの複合体形成が生理的に意味の有るものであることを支持している。

强行表达的核氧化蛋白（NRX）抑制了DVL依赖性的β-catenin稳定化，该核素被发现是与Wnt信号传感器变使人变白（DVL）结合的蛋白质。但是，除了稳定β-catenin外，WNT信号还通过激活RHO和JNK与细胞极性调节有关。为了研究NRX对该途径的影响，我们研究了DVL诱导的JNK激活的影响，并发现NRX对JNK激活没有正面或负面影响。该实验结果表明，NRX选择性抑制了WNT信号之间导致β-catenin稳定的信号途径。接下来，我们研究了NRX抑制β-catenin稳定化的分子机制。已经提出DVL通过称为FRAT/GBP的蛋白质导致β-catenin稳定。在体外使用纯化的蛋白质进行结合实验，并证实这些实验彼此竞争。此外，实验结果表明，NRX和FRAT/GBP在细胞水平上也竞争。因此，建议NRX通过消除DVL的FRAT/GBP来抑制β-catenin稳定。顺便说一句，据报道，在细胞中积累的NRX在细胞核中积累。我的生化细胞裂解液进入细胞核和细胞质，并使用可以特异性识别内源性NRX的抗体进行了西方分析。结果，揭示了内源性NRX在细胞核中几乎不存在，并且在细胞质中很丰富。 DVL是NRX的结合靶标，已知通常存在于细胞质中，支持NRX和DVL复合物形成的生理意义。