脳皮質形成の分子・細胞基盤の解明

阐明大脑皮层形成的分子和细胞基础

基本信息

批准号：
16015299
负责人：
仲嶋一範
金额：
$ 4.42万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年までに、我々は、大脳皮質神経細胞の多くは、スライス培養下において、脳室帯から移動開始直後に多極性移動細胞に変化し、その後再度ロコモーション細胞に変化してから皮質板に入ることを見いだした。そこで本年度は、実際にin vivoにおいて脳表面に到達する神経細胞のうち、脳室下帯・中間帯の多極性細胞に由来するものと、脳室帯からロコモーションで直接脳表面にまで到達(=教科書的「常識」)する細胞が各々どの程度いるのかを定量的に明らかにするとともに、このダイナミックな多極性移動を制御する分子を同定することを目指して解析を行った。まず、子宮内電気穿孔法により、胎生(E)14日の脳室帯にGFP発現ベクターを導入した。その後、12時間(h)後から、3h(<S期=4h)毎にBrdUを8回(導入後33hまで。BrdU投与21h)または13回(48hまで。BrdU投与36h)投与して細胞周期を回っている細胞全てをBrdUラベルした。33h後では、GFP陽性細胞は多極性細胞として脳室下帯に蓄積し、それらはBrdU陰性であるという結果を得た。そこで次に48h脳について、皮質板内を移動中のGFP陽性ロコモーション細胞のBrdU陽性率を調べたところ、その9割以上がBrdU陰性であることがわかった。すなわち、それらは12hまでに最終S期を通過しているはずであり、33h時点で多極性細胞として脳室下帯にあった細胞から生じたと結論できた。すなわち、in vivoにおいても、確かに皮質板神経細胞の多くは多極性細胞に由来することが示された。また、多極性移動細胞は、周囲の細胞外シグナルを探索していると推定される挙動を示すため、GFPを導入後、脳室下帯・中間帯にGFP陽性多極性細胞が濃縮している時期に、脳室下帯・中間帯を切り出して、RNAを調整し、シグナルシークエンストラップ法を行って、多極性細胞に発現する膜貫通蛋白質を検索し、多くの候補分子を得た。

到去年，我们将许多脑皮质神经细胞变成多边转移细胞，从运动开始后立即从大脑房到大脑房，然后转变为大术细胞，然后进入皮质板。因此，今年，在实际在体内到达脑表面的神经细胞中，它们直接从脑室直接从脑室到达脑表面（脑室心室。 “在教科书中，并确定控制这种动态多极性运动的分子。首先，子宫电穿孔方法在胎儿14号（E）的大脑区域中引入了GFP表达载体。然后，在12小时（H）后，BRDU为八次（引入后最多33h），或者在12小时（h）后至细胞周期13次（最多48h，BRDDU给药）。 33H后，GFP阳性细胞积聚在大脑的下部，作为极性细胞，导致BRDU阴性。接下来，GFP阳性运动细胞的BRDU阳性速率在48H脑旁边的皮质板上移动的皮质板上，表明其中超过90％的BRDU为阴性。换句话说，得出的结论是，他们应该在12h之前通过了最后的S期，从33H开始，它们是从下脑房间的细胞中作为极性细胞出发的。换句话说，在体内，表明许多皮质神经细胞源自极性细胞。此外，多极性迁移细胞具有GFP - 阳性细胞集中在较低的脑室和中间带中，以表明估计在探索周围周围的外脉冲信号的行为。调整了RNA，使用信号序列圈圈方法来搜索出现在极性细胞中的膜-Pione -pioneer蛋白，并获得了许多候选物。