新規微量糖鎖C-マンノシルトリプトファンの生物機能の解明

阐明新型微量糖链C-甘露糖基色氨酸的生物学功能

基本信息

批准号：
15040211
负责人：
西川俊夫
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1994年にヒト尿中のRNaseから発見されたα-C-マンノシルトリプトファン(C-Man-Trp)は、TrpとマンノースがC-グリコシドを介して直接結合した全く新規な糖鎖構造である。(C-Mah-Trp)は天然からほとんど入手できないが、申請者らはすでに完全化学合成に成功しているので、化学合成で供給される(C-Man-Trp)およびその分子プローブを活用して、この全く新規な糖鎖の生物機能を解析することを目的として研究を行った。本年度は、まずセファロースに固定化した(C-Man-Trp)を使ってマウス血清から見いだした30KDaの分子量を持つ特異的タンパクの同定を目指して研究を進めた。分子量などから、このタンパクはMBL (Mannose Binding Lectin)である可能性があったが、抗MBL-C, MBL-Aモノクローナル抗体を使った免疫染色実験、および精製したMBL-Cを使った実験からこのタンパクがMBL-C, MBL-Aでないことがわかった。(C-Man-Trp)の超微量分析に不可欠なグルコース、ガラクトースの類縁体の合成を進めアノマーの異性体を含む計6種の糖インドールを合成した。残す3段階によってそれぞれTrpへ変換し、エドマン分解によるペプチドシーケンサーの標品として利用する予定である。また、合成(C-Man-Trp)を抗原としたモノクローナル抗体の調製に着手した。

α-C-甘露糖基色氨酸 (C-Man-Trp) 于 1994 年从人尿中的 RNase 中发现，具有全新的糖链结构，其中 Trp 和甘露糖通过 C-糖苷直接连接。 (C-Mah-Trp)很难从自然界中获得，但申请人已经成功完成了化学合成，因此我们将利用化学合成提供的(C-Man-Trp)及其分子探针，因此我们进行了研究。目的是分析这个全新糖链的生物学功能。今年，我们首先进行了研究，目的是使用固定在琼脂糖凝胶上的 (C-Man-Trp) 来鉴定小鼠血清中发现的分子量为 30KDa 的特定蛋白质。根据其分子量，该蛋白质有可能是MBL（甘露糖结合凝集素），但使用抗MBL-C和MBL-A单克隆抗体的免疫染色实验以及使用纯化的MBL-C的实验表明，该蛋白质不是 MBL-C 或 MBL-A。我们继续合成（C-Man-Trp）超痕量分析所必需的葡萄糖和半乳糖类似物，并合成了总共六种类型的糖吲哚，包括异头异构体。我们计划将剩余三个步骤中的每一个步骤转换为色氨酸，并将其用作使用埃德曼降解的肽测序仪的标准。我们还开始使用合成（C-Man-Trp）作为抗原制备单克隆抗体。