マウス四肢形成異常変異体の発生遺伝学

小鼠肢体发育不良突变体的发育遗传学

基本信息

批准号：
14034261
负责人：
城石俊彦
金额：
$ 2.3万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

多くの軸前側多指症を示すマウス突然変異系統では、発生胚の肢芽におけるShhの発現異常が観察されている。しかし、後肢にのみ多指症を示すXpl系統では、発生胚の肢芽においてShhの発現異常に先立って、Gli1の異常が見られた。このことから、Xpl個体におけるGli1遺伝子非存在下での表現型を解析するため、Gli1ノックアウトマウスとXplとを用いた交配を行い、ダブルヘテロ個体の作製を行った。現在、これらの個体とGli1ノックアウト個体との交配を行っており、ダブルホモ個体の解析のための準備が整っている。さらに、ポジショナルクローニング法により、Xpl変異の候補遺伝子の探索を行った。このため、大規模な戻し交配に基づいた詳細な連鎖解析とBACクロンを用いた物理的地図を作製した。この地図を基に、cDNA選択法とヒト、マウスのゲノム配列データベースを用いた検索により、肢芽で発現する2つの有力な候補遺伝子を単離した。RT-PCRやWhole mout in situ hybridization解析による発現解析の結果、どちらの遺伝子もマウス発生胚の肢芽で発現されていることを確認した。Xpl突然変異体のゲノム解析の結果、Xpl遺伝子のコード領域に塩基置換は見出されなかった。現在、これらの遺伝子のゲノム構造の解析とノックアウトマウスの作製を行っている。

在许多表现出轴前多指畸形的小鼠突变品系中，已观察到发育中胚胎的肢芽中Shh的异常表达。然而，在仅在后肢表现出多指畸形的Xpl品系中，在发育胚胎的肢芽中观察到Shh表达缺陷之前，先观察到Gli1缺陷。因此，为了分析缺乏Gli1基因的Xpl个体的表型，我们通过将Gli1敲除小鼠与Xpl杂交来创建双杂合个体。目前，这些个体正在与Gli1敲除个体杂交，双纯合个体分析的准备工作已经到位。此外，我们使用定位克隆寻找 Xpl 突变的候选基因。为此，我们基于大规模回交和使用 BAC 克隆的物理图谱创建了详细的连锁分析。基于该图谱，我们通过使用cDNA选择方法和人类和小鼠基因组序列数据库进行搜索，分离出在肢芽中表达的两个潜在候选基因。通过RT-PCR和全口原位杂交分析的表达分析结果，我们证实这两个基因在小鼠胚胎的肢芽中表达。作为Xpl突变体的基因组分析的结果，在Xpl基因的编码区中没有发现碱基取代。我们目前正在分析这些基因的基因组结构并创建基因敲除小鼠。