栄養源からのシグナルによる酵母細胞周期の制御機構

营养源信号控制酵母细胞周期的机制

基本信息

批准号：
14033246
负责人：
西沢正文
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

栄養源からのシグナル伝達機構におけるPho85キナーゼの標的の探索と同定Diauxic shiftに伴う遺伝子発現の変化に対するpho85変異の影響をジーンチップを用いて調べた。Diauxic shiftに伴い、糖代謝系のシフト、ミトコンドリア機能の昂進、蛋白質合成の低下が起こることが知られているが、pho85欠失株ではこのような変化に伴う遺伝子発現の変動が正しいタイミングで起こらないことがわかった。今年度は、さらにpho85欠失株ではミトコンドリアの機能に関連する遺伝子の多くが正常に誘導されない、あるいは発現を維持できないこと、シャペロン遺伝子、特にTCP-ring複合体やPrefoldin複合体のサブユニットをコードする遺伝子が発現を維持できないことがわかった。これらの複合体は微小管やアクチン細胞骨格の形成に重要な役割を果たしていることが知られており、Pho85キナーゼがアクチン細胞骨格制御に関係している事実とあわせ興味深い知見である。転写因子をコードするSMP1,転写抑制因子をコードするNRG1,NRG2はpho85欠失株中で構成的に発現量低下を示した。これらはRim101によって転写を抑制されるが、やはりpho85欠失株中で構成的に発現量が低下したCLN2の上流域にもRim101の結合配列が見いだされた。そこで、Pho85がRim101リプレッサーに拮抗するかどうか調べたところ、NRG1とCLN2のpho85欠失株中、での発現低下はrim101欠失変異の導入により解除され、CLN2上流域のRim101結合配列を除去した変異型CLN2プロモーターの活性はpho85欠失株中でも低下しなかった。これらの結果は、Pho85がCLN2のRim101による発現抑制の解除に必要であることを示している。

搜索和鉴定营养源信号转导机制中 Pho85 激酶的靶标我们使用基因芯片研究了 pho85 突变对与双轴转变相关的基因表达变化的影响。已知糖代谢系统的转变、线粒体功能的加速和蛋白质合成的减少伴随双峰转变而发生，但在pho85缺失菌株中，伴随这些变化的基因表达的变化并未在正确的时间发生我发现没有。今年，我们还了解到，在pho85缺失菌株中，许多与线粒体功能相关的基因不能正常诱导或不能维持表达，并且发现伴侣基因，特别是那些编码TCP环复合物和Prefoldin复合物亚基的基因这样做的基因不能维持表达。已知这些复合物在微管和肌动蛋白细胞骨架的形成中发挥重要作用，这是一个有趣的发现，同时事实是 Pho85 激酶参与调节肌动蛋白细胞骨架。编码转录因子的SMP1以及编码转录抑制因子的NRG1和NRG2在pho85缺失菌株中表现出组成性降低的表达水平。它们的转录被Rim101抑制，但在CLN2的上游区域也发现了Rim101结合序列，其表达水平在pho85缺失菌株中组成性降低。因此，我们研究了Pho85是否拮抗Rim101阻遏蛋白，发现通过引入rim101缺失突变，pho85缺失菌株中NRG1和CLN2的表达降低被取消，并且CLN2上游区域的Rim101结合序列的活性被去除。即使在 pho85 缺失菌株中，突变型 CLN2 启动子的活性也没有减少。这些结果表明需要 Pho85 来释放 Rim101 诱导的 CLN2 表达抑制。