ホヤ初期胚細胞の運命決定に関与する遺伝子の機能解析

海鞘早期胚胎细胞命运决定基因的功能分析

基本信息

批准号：
14011235
负责人：
藤原滋樹
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)カタユウレイボヤ卵割期のEST解析によって得られたcDNAの大規模in situ解析を進めた。In situデータはwebサイト(http://ghost.zool.kyoto-u.ac.jp/indexrl.html)にuploadした。昨年度までに得られたものに加えて、さらに多数の割球特異的なcDNAを同定した。(2)割球特異的mRNAをコードする数十のcDNAについて、RNAiやアンチセンスS-オリゴによる機能阻害実験、他の遺伝子のエンハンサーにcDNAを連結して胚に導入し異所的に発現させる実験などを行った。当初、エレクトロポレーションによる遺伝子導入を試みていたが、最近は顕微注入による導入に変更し、データを集めているところである。(3)カタユウレイボヤの9287遺伝子のcDNAを載せたマイクロアレイを作製した(クローンの取得については京大・佐藤矩行教授、アレイ作製と解析は遺伝研・五條堀孝教授と中澤真澄博士のご協力をいただいた)。(4)マイクロアレイを利用して、レチノイン酸標的遺伝子の探索を行った。アレイ解析によりレチノイン酸による発現調節を受けることが予想された約100の遺伝子についてin situ解析を行い、レチノイン酸処理胚における空間的発現の変化を記載した。胚におけるレチノイン酸標的遺伝子は脊椎動物でも行われておらず、今回の解析では多数の新規標的遺伝子を発見できた。この結果はwebサイト(http://www.kochi-u.ac.jp/~tatataa/RA/RA-targets.html)で公開しており、論文も投稿中である。我々の得たデータは、今後他の脊索動物において行われる同様の研究にとってスタンダードとなることが期待される。また、レチノイン酸による発生制御は脊索動物特有のメカニズムなので、本研究は脊索動物の進化を考察する上で重要である。

(1)我们对玻璃海鞘裂解阶段的EST分析获得的cDNA进行了大规模原位分析。现场数据已上传至网站（http://ghost.zool.kyoto-u.ac.jp/indexrl.html）。除了去年获得的 cDNA 之外，我们还鉴定了更多卵裂球特异性 cDNA。 (2)使用RNAi或反义S-oligo对编码卵裂球特异性mRNA的数十种cDNA、与其他基因的增强子连接的cDNA、导入胚胎并异位表达进行了功能抑制实验等。最初，我们尝试通过电穿孔引入基因，但最近我们改为通过显微注射引入基因，目前正在收集数据。 (3)我们创建了含有海鞘Ta)9287个基因的cDNA的微阵列。 (4)我们利用微阵列寻找视黄酸靶基因。我们对大约 100 个基因进行了原位分析，基于阵列分析预测这些基因的表达受视黄酸调节，并描述了视黄酸处理的胚胎中的空间表达变化。即使在脊椎动物中，胚胎中的视黄酸靶基因也尚未被研究过，在这项分析中，我们能够发现许多新的靶基因。结果已发表在网站（http://www.kochi-u.ac.jp/~tatataa/RA/RA-targets.html）上，目前正在提交论文。我们希望我们的数据能够成为未来其他脊索动物类似研究的标准。此外，由于视黄酸控制发育是脊索动物特有的机制，因此这项研究对于考虑脊索动物的进化具有重要意义。