ホヤ初期胚細胞の運命決定に関与する遺伝子の機能解析

海鞘早期胚胎细胞命运决定基因的功能分析

基本信息

批准号：
13202049
负责人：
藤原滋樹
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,カタユウレイボヤの網羅的cDNA解析のデータ(配列および発現)を活用し,発生における細胞運命決定のメカニズムを総合的に捉えることをめざした。1.カタユウレイボヤ卵割期胚の14749クローン(5660クラスター)の配列解析を完了した(解析は京大・佐藤矩行研究室とアカデミアシークエンシングセンターのご協力による)。このうち1200以上のクラスターについてin situ解析を行った。調べた遺伝子の半数以上は,まったく新規の配列であったり,これまで発生生物学分野で注目されてこなかったものであった。またそれらの遺伝子の発現パターンも,これまでの知識から説明できない複雑なものが多く,発生における細胞の運命決定機構について多くの示唆を得た。2.ホヤ胚を用いたRNAiの技術をほぼ確立した。この手法により卵割期に発現する割球特異的転写因子を含む数十の遺伝子の機能解析を行った。RNAiによる発現抑制は起こったが,機能阻害や形態異常は顕著ではなかつた。反応経路がredundantであるためなのかRNAiの技術的な問題なのか現在は不明である。3.米国Joint Genome Institute(JGI)が公表しているゲノム配列を検索して,割球特異的転写因子の遺伝子の上流調節領域を同定した。現在これをクローニングし,レポーター遺伝子を作製中である。4.当初計画にはなかつたが,京大・佐藤矩行教授,遺伝研・五條堀孝教授・中澤真澄博士との共同研究として,ホヤ胚のcDNA約10000クラスターを載せたマイクロアレイを作製した。今後、これを利用してさまざまな発生制御遺伝子のスクリーニングを行う。

在本研究中，我们旨在利用海鞘的综合cDNA分析数据（序列和表达）来全面了解发育过程中细胞命运决定的机制。 1. 完成14749个Ciona卵裂期胚胎克隆（5660簇）的序列分析（与京都大学佐藤典之实验室和学术界测序中心合作进行分析）。其中，超过 1200 个簇进行了原位分析。超过一半的研究基因具有全新的序列或未受到发育生物学领域的关注。此外，这些基因的许多表达模式很复杂，无法用现有知识来解释，并且关于发育过程中细胞命运决定的机制已经获得了许多建议。 2. 我们已经基本建立了利用海鞘胚胎的RNAi技术。使用这种方法，我们分析了数十个基因的功能，包括在卵裂阶段表达的卵裂球特异性转录因子。尽管RNAi抑制了表达，但功能抑制和形态异常并不显着。目前尚不清楚这是由于多余的反应途径还是RNAi的技术问题。 3.我们检索了美国联合基因组研究所（JGI）公布的基因组序列，鉴定了卵裂球特异性转录因子基因的上游调控区域。我们目前正在克隆它并创建一个报告基因。 4.虽然这不在最初的计划中，但作为与京都大学佐藤典之教授、堀五条隆教授和中泽真澄博士联合研究项目的一部分，我们创建了包含来自海鞘胚胎的约 10,000 个 cDNA 簇的微阵列。国家遗传学研究所。未来我们将利用它来筛选各种发育控制基因。