ホヤ初期胚細胞の運命決定に関与する遺伝子の機能解析

海鞘早期胚胎细胞命运决定基因的功能分析

基本信息

批准号：
13202049
负责人：
藤原滋樹
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,カタユウレイボヤの網羅的cDNA解析のデータ(配列および発現)を活用し,発生における細胞運命決定のメカニズムを総合的に捉えることをめざした。1.カタユウレイボヤ卵割期胚の14749クローン(5660クラスター)の配列解析を完了した(解析は京大・佐藤矩行研究室とアカデミアシークエンシングセンターのご協力による)。このうち1200以上のクラスターについてin situ解析を行った。調べた遺伝子の半数以上は,まったく新規の配列であったり,これまで発生生物学分野で注目されてこなかったものであった。またそれらの遺伝子の発現パターンも,これまでの知識から説明できない複雑なものが多く,発生における細胞の運命決定機構について多くの示唆を得た。2.ホヤ胚を用いたRNAiの技術をほぼ確立した。この手法により卵割期に発現する割球特異的転写因子を含む数十の遺伝子の機能解析を行った。RNAiによる発現抑制は起こったが,機能阻害や形態異常は顕著ではなかつた。反応経路がredundantであるためなのかRNAiの技術的な問題なのか現在は不明である。3.米国Joint Genome Institute(JGI)が公表しているゲノム配列を検索して,割球特異的転写因子の遺伝子の上流調節領域を同定した。現在これをクローニングし,レポーター遺伝子を作製中である。4.当初計画にはなかつたが,京大・佐藤矩行教授,遺伝研・五條堀孝教授・中澤真澄博士との共同研究として,ホヤ胚のcDNA約10000クラスターを載せたマイクロアレイを作製した。今後、これを利用してさまざまな発生制御遺伝子のスクリーニングを行う。

在这项研究中，我们旨在利用Katayu Leiboya的综合cDNA分析来利用数据（序列和表达），以全面地掌握开发过程中细胞命运确定的机制。 1。对裂解胚胎的14,749个克隆（5660个簇）的序列分析已经完成（分析是通过京都大学的Sato Norigaki实验室和学术测序中心的合作进行的）。其中，原位分析了1200多个簇。所检查的基因中有一半以上是完全新颖的序列，到目前为止，在发育生物学领域还没有引起人们的注意。这些基因的表达模式也很复杂，不能用先前的知识来解释，并且已经对开发中细胞命运的确定机制提出了许多建议。 2。几乎建立了使用Squirt Embryos的RNAi技术。使用该技术，对数十个含有裂解阶段表达的基因的基因进行了功能分析。尽管RNAi抑制了表达，但功能抑制和形态学异常并不是特别明显。目前尚不清楚是由于冗余反应途径还是RNAi的技术问题。 3。搜索了联合基因组研究所（JGI）发表的基因组序列，以识别基因的上游调节区域，用于胚泡特异性转录因子。它目前正在克隆并正在产生记者基因。 4。尽管不是最初计划的，但与京都大学的Sato Norigaki教授，遗传学的Gojo Hori Takashi教授和Nakazawa Masumi博士合作，我们创建了一个微阵列，其中包含大约10,000个来自Squirt Embryos的CDNA簇。将来，这将用于筛选各种发育调节基因。