ホヤ初期胚細胞の運命決定に関与する遺伝子の機能解析

海鞘早期胚胎细胞命运决定基因的功能分析

基本信息

批准号：
15011241
负责人：
藤原滋樹
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.計15の発生段階(受精卵、2細胞期、4細胞期、8細胞期・・・)のホヤ胚からポリ(A)^+RNAを抽出・精製し、Cy3またはCy5で標識したcDNAプローブを作製した。2.ホヤの全遺伝子の約85%に対応する2万のスポットを載せたオリゴチップを用いて、15の発生段階の胚の遺伝子発現量を解析した。各発生段階のRNA量を受精卵のサンプルと比較することによって、発生段階を通じての遺伝子発現量の増減を追跡した。競合ハイブリダイゼーション実験は全て完了し、データを99のクラスターに分類した。現在、ある程度以下の発現の増減を無視するなどというようなフィルターをかけて、できるだけ意味のあるデータを抽出できるようクラスタリング法を検討中である。オリゴチップ解析は、京大・佐藤矩行教授、北大・安住薫博士と共同で行った。またクラスタリングのアルゴリズムについては北大工学部・原口誠教授のご協力をいただいている。3.オリゴチップ解析により、8〜32細胞期までのごく初期の胚で発現が上昇する50クローンほどピックアップし、in situ解析用のRNAプローブを合成した。これまでに知られている発生制御遺伝子のほとんどは32細胞期よりも後に転写が活性化するので、今回発見した遺伝子は、モザイク発生をするホヤ胚において細胞の運命決定カスケードの最も上位で機能するzygoticな遺伝子の可能性もある。現在、これらの遺伝子のin situ解析を行っている。4.昨年度の特定領域研究の補助を受けて行ったホヤ胚レチノイン酸標的遺伝子のマイクロアレイ解析の結果については、レチノイン酸受容体・合成酵素・分解酵素の発現・機能解析と合わせて数編の論文として発表した。

1. 从总共15个发育阶段（受精卵、2细胞阶段、4细胞阶段、8细胞阶段...）的海鞘胚胎中提取纯化Poly(A)^+ RNA和Cy3标记的cDNA或 Cy5。 2. 使用含有 20,000 个斑点（对应于海鞘中大约 85% 的基因）的寡芯片，我们分析了胚胎在 15 个发育阶段的基因表达水平。通过将每个发育阶段的 RNA 量与受精卵样本进行比较，研究人员追踪了各个发育阶段基因表达的增加和减少。所有竞争杂交实验均已完成，数据被分类为 99 个簇。目前，我们正在考虑一种聚类方法，通过应用忽略低于特定水平的表达增加和减少的过滤器来提取尽可能多的有意义的数据。寡芯片分析是与京都大学的 Noriyuki Sato 教授和北海道大学的 Kaoru Azumi 博士合作进行的。我们还得到了北海道大学工学院 Makoto Haraguchi 教授关于聚类算法的帮助。 3.通过寡芯片分析，我们挑选了约50个在8至32细胞阶段的极早期胚胎中表达升高的克隆，并合成了RNA探针用于原位分析。迄今为止已知的大多数发育控制基因在32细胞阶段后转录被激活，因此新发现的基因在经历嵌合发育的海鞘胚胎中在细胞命运决定级联的最高水平上发挥作用。合子基因。我们目前正在对这些基因进行原位分析。 4、去年在特定领域研究的支持下开展的海鞘胚胎视黄酸靶基因微阵列分析结果，发表多篇论文，并对视黄酸受体、合酶和功能进行了表达和功能分析。降解酶宣布为。