ホヤ初期胚細胞の運命決定に関与する遺伝子の機能解析

海鞘早期胚胎细胞命运决定基因的功能分析

基本信息

批准号：
15011241
负责人：
藤原滋樹
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.計15の発生段階(受精卵、2細胞期、4細胞期、8細胞期・・・)のホヤ胚からポリ(A)^+RNAを抽出・精製し、Cy3またはCy5で標識したcDNAプローブを作製した。2.ホヤの全遺伝子の約85%に対応する2万のスポットを載せたオリゴチップを用いて、15の発生段階の胚の遺伝子発現量を解析した。各発生段階のRNA量を受精卵のサンプルと比較することによって、発生段階を通じての遺伝子発現量の増減を追跡した。競合ハイブリダイゼーション実験は全て完了し、データを99のクラスターに分類した。現在、ある程度以下の発現の増減を無視するなどというようなフィルターをかけて、できるだけ意味のあるデータを抽出できるようクラスタリング法を検討中である。オリゴチップ解析は、京大・佐藤矩行教授、北大・安住薫博士と共同で行った。またクラスタリングのアルゴリズムについては北大工学部・原口誠教授のご協力をいただいている。3.オリゴチップ解析により、8〜32細胞期までのごく初期の胚で発現が上昇する50クローンほどピックアップし、in situ解析用のRNAプローブを合成した。これまでに知られている発生制御遺伝子のほとんどは32細胞期よりも後に転写が活性化するので、今回発見した遺伝子は、モザイク発生をするホヤ胚において細胞の運命決定カスケードの最も上位で機能するzygoticな遺伝子の可能性もある。現在、これらの遺伝子のin situ解析を行っている。4.昨年度の特定領域研究の補助を受けて行ったホヤ胚レチノイン酸標的遺伝子のマイクロアレイ解析の結果については、レチノイン酸受容体・合成酵素・分解酵素の発現・機能解析と合わせて数編の論文として発表した。

1。提取poly（a）^+RNA并从总共15个发育阶段（受精卵，2细胞阶段，4细胞阶段，8细胞阶段等）纯化，并产生了标记为CY3或CY5的cDNA探针。 2。使用寡芯片分析了15个发育阶段的胚胎的基因表达水平，该寡芯片含有20,000个斑点，对应于松鼠中所有基因的85％。通过将每个发育阶段的RNA量与受精卵样本进行比较，跟踪了整个发育阶段基因表达水平的增加或降低。所有竞争性杂交实验均已完成，并将数据分类为99个集群。当前，聚类方法被认为是用来在某种程度上滤除以下表达的增加或减少，并提取尽可能多的有意义的数据。 Oligochip分析是与京都大学的Sato Norigyuki教授和北海道大学的Yasuzumi Kaoru博士合作进行的。此外，北海道大学工程学院的Haraguchi Makoto教授得到了Haraguchi Makoto教授的支持。 3。通过寡芯分析，拾取了8-32个细胞阶段之间非常早期胚胎中表达增加的50个克隆，并合成了原位分析的RNA探针。由于大多数先前已知的发育控制基因在32细胞阶段之后激活转录基因，因此我们发现的基因也可能是在镶嵌大型喷水胚胎中在细胞命运确定级联级联的顶部发挥作用的二细基因。目前，正在对这些基因进行原位分析。 4。去年对特定区域的研究支持的喷气胚酸靶基因的微阵列分析的结果在几篇论文中发表，包括视黄酸受体，合成酶和降解酶的表达和功能分析。