出芽ホヤの形態調節におけるレチノイン酸の役割

视黄酸在海鞘出芽形态调控中的作用

基本信息

批准号：
07262212
负责人：
藤原滋樹
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではミサキマメイタボヤの出芽における分化転換を誘導、制御すると思われる種々の因子の単離と構造・機能解析を行った。1.レチノイン酸は芽体発生における形態調節の場を決定する内在因子である。そこでレチノイン酸合成酵素の候補であるアルデヒド脱水素酵素をコードする遺伝子断片を複数単離した。2つの遺伝子がレチノイン酸合成酵素との相同性を示し、芽体で発現することが分かった。2.レチノイン酸受容体遺伝子のホモログのcDNAを単離し、全塩基配列を決定した。この遺伝子はレチノイン酸を取り込む芽体間充織細胞で時期特異的に発現すること、その発現がレチノイン酸によって誘導されることが分かった。3.2タイプのHox遺伝子を単離した。これらが親個体と芽体の両方で発現していること、特に成体の間充織細胞で領域特異的に発現することから、出芽・再生能力および出芽における位置情報とHox遺伝子の関連が示唆された。4.(1)レチノイン酸によって活性化されるアミノペプチダーゼを単離・精製した。(2)昨年度確立した囲鰓腔上皮由来の株化培養細胞は、精製したアミノペプチダーゼ画分を添加すると著しく増殖した。また抗アミノペプチダーゼ抗体はこの増殖促進効果を阻害した。(3)アミノペプチダーゼは消化管特異抗原の発現をも誘導すること、その誘導効果が細胞外マトリックスによる修飾を受けることが示唆された。5.一方、ホヤの不溶性画分をトリプシン処理して可溶化した上清から株化培養細胞の増殖を促進する活性を得た。この因子を含む画分は脂肪酸を大量に含むがタンパク質含量が非常に少なく、また活性は熱およびプロテアーゼに耐性であることから、この因子が脂肪酸の誘導体であることが示唆されたので、現在さらに精製と分析を進めている。

在这项研究中，我们分离并分析了被认为在Misakimameitaboya出芽过程中诱导和控制转分化的各种因子的结构和功能。 1. 视黄酸是决定胚基发育过程中形态调控领域的内源因子。因此，我们分离了多个编码醛脱氢酶的基因片段，醛脱氢酶是视黄酸合酶的候选者。两个基因与视黄酸合酶表现出同源性，并被发现在胚基中表达。 2.我们分离了视黄酸受体基因同源物的cDNA，并确定了其完整的碱基序列。我们发现该基因在摄取视黄酸的胚基间充质细胞中以特定时期的方式表达，并且其表达是由视黄酸诱导的。 3.2 分离Hox基因类型。事实上，这些基因在亲本个体和芽基中均表达，特别是在成体间充质细胞中的区域特异性表达，表明 Hox 基因与出芽/再生能力和出芽中的位置信息之间的关系。 4.(1)分离纯化视黄酸激活的氨肽酶。 (2)当添加纯化的氨肽酶级分时，去年建立的来自鳃周腔上皮的培养细胞系显着增殖。此外，抗氨肽酶抗体抑制了这种增殖促进作用。 (3)有人提出，氨肽酶还诱导胃肠道特异性抗原的表达，并且诱导效果受到细胞外基质的修饰。 5.另一方面，从用胰蛋白酶处理海鞘不溶级分并将其溶解而获得的上清液中获得促进建立的培养细胞系生长的活性。含有该因子的级分含有大量脂肪酸，但蛋白质含量非常低，并且具有耐热和蛋白酶活性，表明该因子是脂肪酸的衍生物。纯化和分析正在进行中。