CNR遺伝子クラスターから生じる分泌型遺伝子産物の探索と機能解析

CNR基因簇产生的分泌基因产物的搜索和功能分析

基本信息

批准号：
13035028
负责人：
濱田俊
金额：
$ 4.8万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

Cadherin-related Neuronal Receptor(CNR)ファミリーの遺伝子産物の多様性について、分泌型と思われる多様化したアイソフォームについて解析を行った。CNRv4(CNR1)の転写産物をreverse transcription-PCR法により増幅したところ、主要な膜結合型アイソフォームであるA型とB型以外にも多数の増幅産物が認められた。これらの産物について塩基配列決定とサザンブロット法による解析を行った結果、大部分が膜貫通領域を欠失したCNRv4のアイソフォームであることが明らかになった。また、ノーザンブロット法でも膜貫通領域近傍の配列を欠いた転写産物群の存在が示唆された。さらに、この様な転写産物は主に脳で検出され、脳以外の組織ではほとんど検出されなかった。また、得られたcDNAの幾つかをHEK293T細胞等に発現させたところ、一部のアイソフォームでは培養上清中に発現蛋白質が検出された。これら分泌型と想定されるアイソフォームが脳内に蛋白質として存在するかどうか検討するため、CNRv4アミノ末端部に対して作成した二種類の抗体を用いて免疫沈降法による検出を試みたが、微量であるためか、検出は困難であった。分泌型産物の大部分は第一カドヘリンドメインを有しており、膜結合型CNRと相互作用することが想定される。このため、その生理活性の検討には膜結合型CNRの機能を明らかにすることが必要であり、現在膜結合型CNRのなかでも主要なアイソフォームであるAおよびB型の遺伝子改変マウスを作成したので、表現型解析を行い、膜結合型の生理機能を明らかにしたいと考えている。

cadherin相关的神经元受体（CNR）对似乎分泌的多样化同工型分析了家族家族的基因的多样性。通过逆转录PCR方法扩增CNRV4（CNR1）的转录产物，即除了A型和B型外，许多放大产物被观察到许多放大产物，这些分化产物是主要的膜型同工型。由于基本序列的决策和对这些产品的Southern Blotto方法的分析，很明显，其中大多数是失去膜渗透区域的CNRV4同工型。此外，北部的印迹方法表明，在膜穿透区域附近缺少一组抄本。此外，这种转录产物主要在大脑中检测到，在大脑以外的组织中几乎没有检测到。当某些获得的cDNA在HEK293T细胞中表达时，在上级培养物中检测到了一些同工型。为了检查假定为分泌类型的同工型作为大脑中的蛋白质存在，我们尝试使用在CNRV4氨基末端创建的两种类型的抗体来检测免疫沉积法。大多数分泌型产品具有第一个KAD Herendemaye，并有望与膜-Type CNR相互作用。因此，有必要阐明膜-Type CNR的功能，以考虑生理活性，并创建A和B的遗传修饰小鼠，这是当前膜型CNR中的主要同工型进行表达 - 型分析并阐明膜型生理功能。