Fynが結合する新しいカドヘリン様蛋白質

Fyn 结合的一种新的钙粘蛋白样蛋白

基本信息

批准号：
13216063
负责人：
濱田俊
金额：
$ 4.86万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216063/
关键词：
チロシンキナーゼカドヘリン遺伝子生体分子生理活性

项目摘要

本年度は1)CNR遺伝子欠損マウスの作製とその組織構築異常の解析、2)CNR蛋白質細胞内領域に結合する分子の同定、3)がん化細胞株におけるCNRファミリー分子の発現解析を行った。1)本年度、CNR-AおよびCNR-B alternative formに固有な領域を選択的に欠損させたターゲッティングマウスの作成に成功した。CNR-AホモマウスではCNR-Aに固有な領域を欠失した蛋白質が生じていることを免疫沈降法およびイムノブロット法により確認した。またCNR-Bホモマウスでは、Splicing siteの近傍にネオマイシン耐性遺伝子が挿入されたため、CNR-B alternative splicing formが選択的に欠失していることが明らかになった。これらのマウスについて外観上の形態学的、行動学的異常を観察したが、現在までのところ顕著な異常は見いだされていない。両ホモ欠損マウスは雄および雌とも繁殖可能であり、現在C57BL/6マウスに戻し交配を行いつつ、解析を進めている。2)yeast-two hybrid法を用いて行ったCNR蛋白質細胞内領域と相互作用する分子のスクリーニングでは、3種類のライブラリーを用いてスクリーニングを行い、セリン/スレオニンキナーゼなど2種類の候補遺伝子が得られた。今後さらにスクリーニングを行うと共に、得られた候補遺伝子に関してはin vivoでの複合体形成の確認、結合領域の決定を行いたい。3)がん化細胞株におけるCNRファミリーの発現をRT-PCR法により検索したが、neuroblastoma, pheochromocytoma, melanoma由来のがん化細胞株においてCNRのmRNAの発現がみられることが明らかになった。今後さらに多数の株についてスクリーニングを行うと共に、これらがん化細胞に発現しているCNRのmRNA、蛋白質の構造異常について検討したい。

在这个财政年度，1）CNR基因缺陷型小鼠及其组织构建分析，2）鉴定与CNR蛋白细胞的细胞内区域结合的分子，并分析了癌细胞中CNR家族分子的表达。 1）今年，我们成功地创建了靶向小鼠，这些小鼠有选择地缺陷CNR-A和CNR-B替代形式所独有的区域。 CNR-A HOMO MAUSS通过免疫沉淀法和IMNOBLOT方法证实了一种在CNR-A中失去了自己区域的蛋白质。在CNR-B同性恋中，据揭示了CNR-B替代剪接形式被选择性地删除，因为在剪接位点附近插入了耐新霉素的基因。到目前为止，尚未发现这些小鼠的外观和行为异常观察这些小鼠的外观。两只均缺乏的小鼠可以繁殖男性和女性，目前正在返回C57BL/6小鼠，并在越过时越过。 2）在筛选使用酵母 - 两种混合方法进行的CNR蛋白细胞的细胞内区域相互作用时，使用三种类型的文库进行筛选，并获得了两种类型的候选者。将来，我想进行更多的筛选，确认体内复合形成，并确定获得的候选基因的结合区域。 3）搜索了RT-PCR方法在癌症偶联细胞中搜索了CNR家族的表达，但发现CNR mRNA的表达在神经母细胞瘤，嗜铬细胞瘤和黑色素瘤衍生的癌细胞储备中可见。将来，我想在将来筛选更多份额，并考虑在癌细胞中表达的CNR的mRNA和蛋白质的结构异常。