シャペロニング機能を有する分子シンクロシステムの構築

具有陪伴功能的分子同步系统的构建

基本信息

批准号：
13022233
负责人：
秋吉一成
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University (2002)Kyoto University (2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、タンパク質の状態とシンクロして分子シャペロニング機能を発現しえる新規な動的機能性ナノゲルの設計と利用を図っている。スピロピランは、フォトクロミズムに伴って親水性・疎水性の変換や大きな構造変化を引き起こす化合物である。従来の疎水基に変えて高分子の会合制御因子として、この分子を多糖に部分置換した新規会合成高分子スピロピラン置換プルラン(SpP)の合成とその会合挙動を検討してきた。その結果、SpPはナノ微粒子を形成し、光、熱により動的に会合状態が変化する新しいナノ微粒子であることが明らかになった。本年度は、このナノ微粒子の蛋白質のリフォールディングにおけるシャペロン作用について検討し、新しい光応答性人工分子シャペロンとして機能することが明らかになった。SpPナノ微粒子のシャペロン作用を、モデル酵素としてホモ2量体であるCitrate Synthase(CS、Mw_<subunit>=50,000)を用いて検討を行った。CS(1.0mg/ml)を6MGuHClによって変性させ、50倍希釈によるリフォールディング実験を行った。希釈後の酵素活性を測定し、天然状態のそれと比較することで活性回復率を見積もり、シャペロン活性を評価した。自発的な系では30%しか酵素は再生しなかった。一方スピロ型(Spiro)のSpPナノ微粒子を調製し、可視光照射下リフォールディング実験を行ったところわずかながらシャペロン活性が見られた(〜40%)。メロシアニン型(Mer)のSpPナノ微粒子を調製し暗所下においてリフォールディングを行わせると、顕著なシャペロン活性を示した(〜60%)。さらに、Merでリフォールディングを開始し暗所下で30分ほど放置してから、可視光照射しSpiroにした系では、非常に大きなシャペロン活性を示した(80%)。このようにSpPはスピロピラン基の親水性・疎水性を制御することで高いシャペロン作用を示す新しいシステムとして機能することが明らかになった。

在这项研究中，设计和使用新的动态功能纳米凝胶，该功能纳米凝胶与蛋白质状态同步并表达分子教堂函数。 Spiropilan是一种化合物，可引起亲水性和疏水性能的转化以及与光成色的重大结构变化。作为一个常规的疏水群，作为聚合物会议控制因素，我们研究了新组铂替代plun（SPP）的合成，后者部分用多糖及其会议行为替换。结果，据揭示了SPP是形成纳米粒子的新型纳米粒子，并因光和热而动态改变了会议状态。今年，据揭示，这种纳米蛋白粒子在重染中的雪花龙效应将充当一种新的光学响应人工分子分子分子分子分子分子分子。使用柠檬酸合成剂（CS，MW_ <ubunit> = 50,000）检查了SPP纳米粒子，这是两剂的HOOMO作为模型酶。用6个MGUHCL退化CS（1.0 mg/mL），并进行了50倍的改革实验。通过测量稀释的酶活性并将其与自然状态进行比较来估计活性回收率，并评估了伴侣活性。在自发系统中，只有30％的酶被再生。另一方面，制备了螺旋形型（Spiro）SPP纳米方颗粒，并在可见光下进行翻新实验。当在黑暗的地方制备并改革旋律anin型（MER）SPP纳米粒子时，它显示出显着的伴侣活性（约60％）。此外，在MER进行翻新后，在黑暗的地方呆了大约30分钟，然后可见光的光照射和Spiro显示出非常大的伴侣活性（80％）。通过这种方式，已经揭示了SPP充当一个新系统，该系统通过控制螺旋藻基团的亲水性和疏水性能来显示高伴侣效应。