中枢神経系におけるイノシトール1,4,5-三リン酸結合蛋白

中枢神经系统中的肌醇 1,4,5-三磷酸结合蛋白

• 批准号: 09259228
• 负责人: 平田 雅人
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09259228/
• 关键词: Ins(1,4,5)P_3; 細胞内Ca^<2+>濃度; ホスホリパーゼC

新しいD-ミオ-イノシトール1,4,5-三リン酸(Ins(1,4,5)P_3)結合蛋白質(p130)を見い出した。p130の細胞内機能を探るための研究を遂行した。1.安定的にp130を発現するCOS-1細胞株を作製し、ブラジキニン(Bk)や上皮成長因子(EGF)刺激に伴う細胞内Ca^<2+>濃度変化を測定した。対照に比し、Bk刺激によるCa^<2+>反応の減弱化が認められた。この結果は濃度-反応曲線が右方シフトしたためであることが分かった。EGF刺激の場合も基本的には同じ結果が得られた。この原因として二つのことが考えられる。発現したp130が細胞膜の内側にあるホスファチジルイノシトール4,5-二リン酸(PtdIns(4,5)P_2)に結合して、PLC活性化による加水分解をブロックしたか、あるいは、PLC活性化によって生成したIns(1,4,5)P_3がp130によって結合され、小胞体上の受容体に結合する量を減らしたためか、である。これを区別するため、Bk刺激によって細胞内に生成したIns(1,4,5)P_3を定量した。刺激前の量はp130を過剰発現した細胞のほうがむしろ多く、刺激に伴って生成するIns(1,4,5)P_3量に対照との相違は認められなかった。この結果は後者の可能性が高いことを支持している。したがって、p130は細胞内Ca^<2+>反応のnegative regulatorとして働いている可能性が考えられる。2.In situハイブリダイゼーションによって中枢神経におけるp130のmRNAの分布を調べた。小脳のプルキンエ細胞、顆粒細胞層、大脳では皮質の特定の細胞層、また、海馬、歯状回に多く分布していることが分かった。

我们发现了一种新的 D-肌醇 1,4,5-三磷酸 (Ins(1,4,5)P_3) 结合蛋白 (p130)。我们进行了研究来探索 p130 的细胞内功能。 1.我们创建了稳定表达p130的COS-1细胞系，并测量了缓激肽(Bk)和表皮生长因子(EGF)刺激后细胞内Ca 2+ 浓度的变化。与对照相比，Ca 2+ 反应因Bk刺激而减弱。发现该结果是由于浓度-反应曲线向右移动所致。 EGF刺激获得了基本相同的结果。造成这种情况的可能原因有两个。表达的 p130 要么与细胞膜内侧的磷脂酰肌醇 4,5-二磷酸 (PtdIns(4,5)P_2) 结合并阻止 PLC 激活引起的水解，要么是由 PLC 激活产生的。 (1,4,5)P_3 与 p130 结合，减少与内质网上受体的结合量。为了区分这两者，我们量化了 Bk 刺激后细胞内产生的 Ins(1,4,5)P_3。过表达p130的细胞在刺激前的量实际上更高，并且与对照相比，刺激后产生的Ins(1,4,5)P_3的量没有观察到差异。这一结果支持了后一种可能性。因此，p130可能充当细胞内Ca 2+ 反应的负调节剂。 2.我们通过原位杂交研究了p130 mRNA在中枢神经系统中的分布。研究发现，它高度分布在小脑的浦肯野细胞和颗粒细胞层、大脑皮层的特定细胞层以及海马和齿状回中。

项目成果

Hirata,M.: "Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor subtypes differentially recognize regioisomers of D-myo-inositol 1,4,5-trisphosphate." Biochem.J.328. 93-98 (1997)

Hirata,M.：“肌醇 1,4,5-三磷酸受体亚型差异性地识别 D-肌醇 1,4,5-三磷酸的区域异构体。”

Yagisawa,H.: "Replacements of single basic amino acids in the pleckstrin homology domain of phospholipase C-^δ1 alter the ligand binding,phospholipase activity and interaction with the plasma membrane." J.Biol.Chem.273. 417-424 (1998)

Yagisawa, H.：“磷脂酶 C-^δ1 的普莱克斯特林同源结构域中单个碱性氨基酸的替换改变了配体结合、磷脂酶活性以及与质膜的相互作用。”J.Biol.Chem.273（ 1998）

Hirata,M.: "Intrinsic inhibitor of inositol 1,4,5-trisphosphate binding." Mol.Cell.Biochem.(in press). (1998)

Hirata,M.：“肌醇 1,4,5-三磷酸结合的内在抑制剂。”

Takeuchi,H.: "Distinct specificity in the binding of inositol phosphates by pleckstrin homology domains of pleckstrin,RAC-protein kinase,diacylglycerol kinase and a new 130-kDa protein." Biochim.Biophys.Acta. 1359. 275-285 (1997)

Takeuchi, H.：“pleckstrin、RAC 蛋白激酶、二酰甘油激酶和新的 130 kDa 蛋白的 pleckstrin 同源结构域与肌醇磷酸盐的结合具有明显的特异性。”