ras抑制変異体を用いた消化器癌に対する遺伝子治療の基礎研究

ras抑制突变体治疗胃肠癌基因治疗的基础研究

基本信息

批准号：
09255202
负责人：
葛巻暹
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

われわれは先に、ウイルス由来の癌遺伝子v-H-Ras遺伝子がコードする116番目のアミノ酸をアスパラギンからチロシンに置換させた人工変異体N116Yが、ヒトの様々な癌の試験管内あるいはヌードマウスにおける増殖の抑制やアポトーシスの誘導をひきおこすことを証明してきた.本研究では、アデノウイルスベクターを用い、Ras抑制変異体遺伝子N116Yを予後不良な消化器癌の一つであるヒト食道癌の細胞株に遺伝子導入して、in vitroでの増殖抑制効果とそのメカニズムを検討すると共に、in vivoにおけるN116Yの治療効果を検討し、以下の成績を得た.1.Ras抑制変異体遺伝子N116Yを組み込んだアデノウイルスペクターAdCMV-N116Yを感染させたヌードマウス可移植性ヒト食道癌細胞株TE8、SGF3、SGF7では、N116Y mRNAの発現が認められ、in vitroでの増殖がコントロールの10-20%に抑制された.また、TE8、SGF7では軟寒天倍地内コロニー形成率も有意に低下していた.2.AdCMV-N116Y感染TE8細胞では、細胞周期G1の蓄積がみられ、またAdCMV-N116Y感染TE8、SGF3、SGF7では、コントロール細胞でみられるEGF刺激後のMAPキナーゼカスケードでのErk2のリン酸化型(pp42)が認められなかった.3.ヌードマウスに移植したTE8やSGF3に対し、AdCMV-N116Yを直接投与したところ腫瘍増殖抑制効果が観察された.以上により、アデノウイルスベクターN116Yが食道癌手術後の遺伝子治療に用いられる可能性が示された.

我们先前已经证明，人造突变体N116Y已被病毒衍生的癌基因V-H-RAs用酪氨酸替代，可以抑制各种人类癌症或裸体小鼠中的各种人类癌症中的增殖并诱导凋亡。预后较差的消化癌研究了体外生长抑制作用及其机制。研究了N116Y在体内的治疗效果，并获得了以下结果。1。在移植的人类食管癌细胞系TE8，SGF3和SGF7中，感染了腺病毒PETORAD ADCMV-N116Y，其中结合了RAS抑制突变体基因N116Y，表达了N116Y mRNA，并表达了N116Y mRNA，并且在体内抑制了10-20％的对照组。此外，TE8和SGF7还显着降低了软琼脂中菌落形成的速率2。在ADCMV-N116Y感染的TE8细胞中观察到了细胞周期G1的积累，在ADCMV-N116Y感染的TE8细胞中观察到ADCMV-N116Y感染的TE8，SGF3和SGF7，在对照细胞中EGF刺激后，MAP激酶级联的ERK2（PP42）的磷酸化形式（PP42）未观察到3.3。直接对ADCMV-N116Y给予TE8和植入裸鼠的SGF3，并观察到肿瘤生长抑制作用。这表明腺病毒载体N116Y可在食管癌症手术后用于基因治疗。