アクチン調節蛋白質ゲルゾリンの細胞増殖における役割に関する研究

肌动蛋白调节蛋白凝溶胶蛋白在细胞增殖中的作用研究

基本信息

批准号：
02454163
负责人：
葛巻暹
金额：
--
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト活性化H<ーras>___ー癌遺伝子によって癌化したマウス腫瘍EJーNIH/3T3に変異原を与えて,増殖能力の著しく抑制された正常復帰変異細胞株R1,R2を得た。これらの変異株のサイトゾ-ル画分では,分子量約92,000,等電点約5.7のタンパク質p92ー5.7が新しく発現しており,その発現量は増殖抑制の程度と相関が見られることが証明された。p92ー5.7はその分子量からアクチン調節機能を持つゲルゾリン関連タンパク質である可能性が予想されたので,抗ゲルゾリン抗体によるウエスタンブロットを行ったところ,p92ー5.7はこの抗体と反応した。しかし,R1細胞由来のタンパク質をアルカリフォスファタ-ゼで処理してもp92ー5.7は消失せず,またこのスポットにリンの取り込みも見られなかった。このことから,p92ー5.7は既存のゲルゾリンのリン酸化によって生じたものではなく,ゲルゾリンの変異体あるいはゲルゾリン様タンパク質であると考えられた。さらにゲルゾリンmRNAの発現をノ-ザンブロット法で調べたところ,R1,R2においてEJーNIH/3T3よりも高い発現が認められた。ゲルゾリン遺伝子のサザン解析では,遺伝子の再編成あるいは増幅は見られず,R1細胞におけるゲルゾリン遺伝子発現の亢進はこれら以外の原因によるものと考えられた。そこで,R1のcDNAライブラリ-より得られたゲルゾリンのクロ-ンについて解析したところ,R1のゲルゾリン遺伝子には突然変異がおこっている可能性が示唆された。これらのゲルゾリン遺伝子の変化に伴って,R1細胞においてはEJーNIH/3T3細胞で消失したαーアクチンの遺伝子発現がNIH/3T3細胞レベルに回復した。これらのことから,アクチン調節タンパク質のひとつゲルゾリン遺伝子の発現は細胞増殖を制御する上で重要な役割を持っていることが示された。

将诱变剂送给小鼠肿瘤EJ-NIH/3T3，该诱变剂被人体活化的H <-RAS> ___癌基因癌癌，以获得正常的被重复的细胞系R1，R2，其具有显着抑制的增殖能力。在这些突变体的胞质分数中，新表达的蛋白p92-5.7蛋白质p92-5.7约为92,000，等电点约5.7，并且证明表达水平与生长抑制程度相关。由于预测P92-5.7是一种基于其分子量的凝胶蛋白相关蛋白具有肌动蛋白调节功能的蛋白质，因此用抗凝血素抗体的蛋白质印迹显示P92-5.7与该抗体反应。但是，当用碱性磷酸酶处理源自R1细胞的蛋白质时，未消除p92-5.7，并且在这个地方未观察到磷的摄取。这表明p92-5.7不是由现有凝胶素磷酸化引起的，而是被认为是凝胶蛋白或凝胶蛋白样蛋白的突变体。此外，当通过北印迹检查凝胶素mRNA的表达时，发现R1和R2高于EJ-NIH/3T3。南方对凝胶素基因的分析没有基因重排或扩增，人们认为R1细胞中凝胶素基因的表达增加是由于其他原因引起的。因此，对从R1 cDNA文库获得的凝胶素克隆的分析表明，R1的凝胶素基因可能发生突变。随着凝胶素基因的这些变化，在EJ-NIH/3T3细胞中丢失的α-肌动蛋白的基因表达恢复到R1细胞中NIH/3T3细胞的水平。这些结果表明，肌动蛋白调节蛋白之一的凝胶素基因的表达在调节细胞增殖中起着重要作用。