哺乳動物精子形成細胞の分化と死の調節機構の解析

哺乳动物生精细胞分化和死亡调控机制分析

基本信息

批准号：
08275215
负责人：
中西義信
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08275215/
关键词：
精子形成アポトーシス貧食細胞接着因子分化

项目摘要

哺乳動物の精子形成細胞は、精子へ分化する一方、その7割以上が成熟前に死んでしまう。この研究では、精子形成細胞の分化と死の調節機構を、精巣内体細胞のひとつであるセルトリ細胞との相互作用に注目して解析した。研究代表者らが開発したラット精巣細胞の初代培養系では、精子形成細胞の分化とアポトーシスによる死が再現される。アポトーシスを起こした精子形成細胞では、それまで細胞膜二重層の内側層に局在していたフォスファチジルセリン(PS)が外側層に移行し、それが目印となってセルトリ細胞に貧食されることがわかった。PSだけでなくフォスファチジルエタノールアミンの細胞表層への露出も観察されたことより、アポトーシスに伴って精子形成細胞の細胞膜リン脂質の非対称的分布が失われるものと思われる。分画した精子形成細胞を貧食反応に用いたところ、1n、2n、4nいずれの染色体倍数性を持つ細胞もほぼ同程度に貧食され、どの反応でもPSがマーカーとなっていた。さらに、セルトリ細胞表層に存在すると予想されるPS受容体を同定するために、PS結合性が知られるSR-BIのcDNAをセルトリ細胞のライブラリーからローン化した。現在このSR-BIの機能を解析中である。精子形成細胞の分化にはセルトリ細胞との接触が必要である。そこで、両細胞の接着アッセイ法を確立して、精子形細胞に成存在すると予想される細胞接着因子cDNAのクローニングを試みた。精子形成細胞のcDNAライブラリーを接着活性のないJurkat細胞に導入し、接着性を獲得した細胞を選別した。それらの細胞からcDNAを回収し、再度接着アッセイを行って、jurkat細胞に細胞接着性を賦与するクローンをひとつ同定した。得られたcDNAは精細胞に存在する既知のタンパク質をコードしており、現在その機能を解析中である。

而哺乳动物的精子发生细胞分化为精子，而超过70％的人死亡之前死亡。在这项研究中，分析了精子发生细胞的分化和死亡调节的机制，并注意它们与睾丸中的体细胞之一的Sertoli细胞相互作用。由研究人员开发的大鼠睾丸细胞的主要培养系统重现了精子发生细胞的分化和凋亡引起的死亡。在患有细胞凋亡的精子发生细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）以前曾位于细胞膜双层的内层中，迁移到外层，并成为标记物，并被Sertoli细胞食用。不仅PS而且还观察到磷脂酰乙醇胺暴露于细胞的表面层，而且似乎由于细胞凋亡而丢失了精子发生细胞中细胞膜磷脂的不对称分布。当分馏的精子发生细胞用于不良饮食中时，几乎同样差的1N，2N或4N染色体倍性的细胞被食用，而PS是所有反应中的标志物。此外，要鉴定有望存在于Sertoli细胞表面层中的PS受体，SR-BI的cDNA（以PS结合而闻名）是从Sertoli细胞库中借出的。当前，正在分析此SR-BI的功能。精子发生细胞的分化需要与Sertoli细胞接触。因此，建立了两个细胞的粘附测定，并试图克隆细胞粘附因子cDNA，预计将存在于精子形细胞中。将精子发生细胞的cDNA库引入没有粘附活性的Jurkat细胞中，并对实现粘附的细胞进行了排序。从这些细胞中收集cDNA，并重新安装测定，以识别一个赋予细胞粘附于Jurkat细胞的克隆。所得的cDNA编码存在于精子细胞中的已知蛋白质，目前正在分析其功能。