ウイルス感染細胞におけるアポトーシス関連遺伝子の協調的発現機構

病毒感染细胞凋亡相关基因的协调表达机制

• 批准号: 07258205
• 负责人: 中西 義信
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07258205/
• 关键词: ウイルス; アポトーシス; Fas; 遺伝子発現; 転写制御; ウイルス; アポトーシス; Fas; 遺伝子発現; 転写制御

HeLa細胞にインフルエンザウイルスを感染させると、Fasリガンドとその受容体Fasの生産量が転写段階で増加し、その後にアポトーシスが誘導される。これまでの研究により、(1)ヒト FAS遺伝子の-1435/+236の領域がコアプロモーターおよびウイルス感染による転写促進に必要な配列を含む、(2)この領域にはNF-IL6の結合可能な配列が8箇所散在し、NF-IL6を過剰発現させるとFasプロモーター活性が促進される、(3)ウイルス感染細胞ではNF-IL6のDNA結合活性が翻訳後調節により促進される、ことなどが明らかになっている。ここでは、インフルエンザウイルス感染細胞におけるFAS遺伝子転写の促進機構についてさらに解析を加えた。まず、FAS遺伝子の上流および下流域をさまざまに欠失させて、転写調節に必要な領域の同定を試みた。その結果、-27/+48、+42/+235の領域のいずれかを失うと、プロモーター活性が2割以下にまで低下することがわかった。前者は転写開始点を後者はNF-IL6の結合可能配列をそれぞれ含んでいる。今のところ、基本プロモーターとウイルス感染依存の転写促進に必要なDNA領域を分離できていない。次にNF-IL6の翻訳後調節機構を解析した。ドミナントネガティブ型の二本鎖RNA依存タンパク質リン酸化酵素(PKR)を発現するHeLa細胞を用いた解析により、Fasの発現量増加および感染細胞のアポトーシスにPKRが必要であることが示された。また、感染細胞ではNF-IL6のリン酸化が増加することがわかった。以上より、インフルエンザウイルスの複製時に出現する二本鎖RNAによってPKRが活性化される→活性化PKRがNF-IL6をリン酸化する→リン酸化されたNF-IL6がFAS遺伝子の下流域に結合して転写促進を行う、という図式が予想される。

感染流感病毒的HeLa细胞会在转录阶段增加FAS配体及其受体FAS的产生，然后凋亡。先前的研究表明，（1）人类FAS基因的-1435/+236区域包含核心启动子和通过病毒感染促进转录促进所必需的序列，（2）该区域包含八个可以结合NF-IL6的序列，NF-IL6的过度表达NF-IL6促进了Fas启动子促进者的活性，并促进NF-6的促进活性。病毒感染的细胞。在这里，对促进流感病毒感染细胞中Fas基因转录的机制进行了进一步的分析。首先，各种缺失由FAS基因的上游和下游区域组成，以识别转录调控所需的区域。结果表明，-27/+48或+42/+235区域的损失使启动子活性降低到小于20％。前者包含转录起源，后者包含NF-IL6的结合序列。目前，尚未分离以病毒感染依赖性方式转录促进所需的基本启动子和DNA区域。然后分析了NF-IL6的翻译后调节机制。使用表达显性阴性双链RNA依赖性蛋白磷酸酶（PKR）的HeLa细胞的分析表明，PKR是FAS表达增加和受感染细胞凋亡所必需的。还发现，在感染细胞中，NF-IL6的磷酸化增加了。从上面可以预测，PKR被双链RNA激活，在复制流感病毒→活化的PKR磷酸化NF-IL6→磷酸化的NF-IL6磷酸化中，该RNA与Fas基因的下游区域结合并促进转录。