C型肝炎ウイルスのツパイ感染実験モデル系の開発

树鼩丙型肝炎病毒感染实验模型系统的建立

• 批准号: 13878174
• 负责人: 小原 恭子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13878174/
• 关键词: HCV; ツパイ; Fas; アポトーシス

C型肝炎ウイルス(HCV)は感染後高率に持続感染を成立し、慢性肝炎・肝硬変に移行して肝がんを引き起こす。日本では全人口の約2%が抗体陽性であるが、有効な実験動物モデルがない事がその解決の大きな障害となっていた。これに対し我々は、ツパイをHCVの感染動物モデルとして樹立する事を目指して解析を行なった。ツパイの血液性状は他のマカク等のサルとほとんど変わらない事が明らかとなった。また、1回の採血量は1匹あたり0.5mlが限度であり採取できるリンパ球数は1x10^5以下と少なくCTL活性は血中のIFN-γ測定による方が好ましい事が明かとなった。ツパイへのHCV外被膜蛋白の免疫には我々が開発した麻疹ウイルス(MV)ベクターを用いる事とし、予めツパイのリンパ球で、MVが感染する事を確認した上で組み換えMVの作製を行なっている。HCV持続感染成立の分子メカニズムを解明するため、我々の樹立したHCV構造蛋白のトランスジェニック(Tg)マウス解析も行なった。マウスに抗Fas抗体を投与すると、劇症肝炎を起こして12時間以内に50%が死亡するのに対し、HCV構造蛋白発現下ではほとんど死ななくなる事を見いだした。Fas下流の経路を解析したところCaspase8活性には差がないがCaspase9活性は低下している事が明らかとなった。そこで、この間のミトコンドリア経路が修飾されている可能性が考えられたため、肝細胞ミトコンドリアからのチトクロームC放出を検討したところ、HCV Tgマウスでは抑制されていた。以上の知見はHCVがアポトーシスを阻害して持続感染を成立させている可能性を強く示唆しており、ツパイ感染系でもこれらの検証を行なっていく予定である。

丙型肝炎病毒（HCV）导致感染后的高感染率，导致慢性肝炎和肝硬化，导致肝癌。在日本，大约有2％的总人口为抗体阳性，但是缺乏有效的实验动物模型一直是该问题的主要障碍。作为回应，我们分析了Tupai，目的是建立用于HCV感染的动物模型。据透露，Supra的血液特性几乎与其他猴子（例如猕猴）相同。此外，每只狗的血液量限制为0.5 mL，并且可以收集的淋巴细胞数量低在1x10^5或更少，并且发现CTL活性是通过血液中的IFN-γ的测量而获得的。我们开发的麻疹病毒（MV）载体用于免疫HCV外膜蛋白，并确认MV被Tupai的淋巴细胞感染后，我们制备了重组MV。为了阐明持续性HCV感染的分子机制，我们还对已建立的HCV结构蛋白进行了转基因（TG）小鼠分析。发现对小鼠施用抗FAS抗体会导致暴发性肝炎，并在12小时内导致50％的死亡，而在HCV结构蛋白表达下几乎没有死亡。对FAS的下游途径的分析表明，CASPASE8活性没有差异，但是CASPASE9活性降低了。因此，认为在此期间的线粒体途径可能已经修改，当我们研究了从肝细胞线粒体中释放细胞色素C时，它在HCV TG小鼠中被抑制。以上发现强烈表明HCV可能抑制凋亡并导致持续感染，我们计划验证Tupai感染系统中的这些感染。

项目成果

小原 恭子: "C型肝炎ウイルスの翻訳開始機構及び病原性発現機序の解析"ウイルス. 51. 1-9 (2001)

大原恭子：“丙型肝炎病毒的翻译起始机制和致病性表达机制分析”病毒。 51. 1-9 (2001)

小原 恭子: "図説:HCVの肝細胞障害・持続感染機序"日本臨床. 59. 1238-1241 (2001)

Kyoko Ohara：“图解：HCV 肝细胞损伤和持续感染的机制”日本临床杂志 59. 1238-1241 (2001)。

Tsukiyama-Kohara, T. et al.: "Adipose Tissue Reduction in Mice Lacking the Translational Inhibitor 4E-BPl"Nature Medicine. 7. 1128-1132 (2001)

Tsukiyama-Kohara，T.等人：“缺乏转化抑制剂4E-BP1的小鼠脂肪组织减少”《自然医学》。

Ishida, S., et al.: "Icosahedral Hepatitis C Virus Core Particles Detected by Immunoelectron Microscopy and Rotation Technique"Hepatology Research. 20. 335-347 (2001)

Ishida, S. 等人：“通过免疫电子显微镜和旋转技术检测二十面体丙型肝炎病毒核心颗粒”肝病学研究。

小原 恭子: "代謝および脂肪分化制御における4E-BP1の新たな役割"実験医学. 7. 1128-1132 (2002)

Kyoko Ohara：“4E-BP1 在调节代谢和脂肪分化中的新作用”实验医学 7. 1128-1132 (2002)。