M期サイクリン、サイクリンAとBの細胞分裂進行における機能分担に関する研究

M期细胞周期蛋白A和B在细胞分裂过程中的功能分裂研究

基本信息

批准号：
08265221
负责人：
久永真市
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265221/
关键词：
cdc2 サイクリン細胞分裂がん細胞増殖ヒトデ減数分裂卵

项目摘要

本研究の当初の目的は、がん細胞であるHeLa細胞を用いて細胞分裂進行に最も重要なサイクリンB・cdc2キナーゼとサイクリンA・cdc2キナーゼを、アンチセンスなどの方法により一方のみを不活性化し、それらの機能的な違いを明らかにしようとするものであった。しかし、同調した細胞での遺伝子導入が上手くいかず、材料をヒトデ卵に変えて研究を行った。cdc2キナーゼは真核細胞に共通の分裂期促進因子であり、細胞が異なってもその役割は変化しないものと考えられる。ヒトデ卵母細胞の第一減数分裂時には、サイクリンB・cdc2キナーゼのみが活性化され、サイクリンA・cdc2キナーゼの活性は第二減数分裂の分裂中期に初めて現れ、卵割期には両者の活性が検出された。サイクリンB・cdc2キナーゼは活性化にcdc25によるチロシン残基の脱リン酸化が必要であるのに対して、サイクリンA・cdc2キナーゼはチロシンリン酸化による活性制御を受けず、サイクリンAと結合すると直ちに活性化される。即ち、cdc25の活性化を阻害すれば、サイクリンA・cdc2キナーゼだけが活性化された状態がえられるはずである。そこで、cdc25の活性を阻害する抗体をヒトデ卵の第一卵割期前に微量注入し、細胞分裂の進行を観察した。実際に、サイクリンB・cdc2キナーゼの活性化が抑えられ、サイクリンA・cdc2キナーゼのみの活性が捉えられた。この時、細胞分裂は通常より20分ほど遅れて起こった。分裂が起こった時期には、サイクリンA・cdc2キナーゼの活性がサイクリンB・cdc2キナーゼの不足を補うように増加していたことから、全cdc2キナーゼの活性が一定レベルまで達すれば、分裂が進行するという可能性が考えられた。現在、詳しい解析を行っているところである。

这项研究的最初目的是使用癌细胞的HeLa细胞仅使细胞周期蛋白B和CDC2激酶中的一种失活，这是使用反义方法的细胞分裂进展中最重要的因素，以揭示它们之间的功能差异。但是，有症状细胞中的基因转移不起作用，因此我们将材料更改为海星卵进行研究。 Cdc2激酶是真核细胞中常见的有丝分裂促相因子，即使细胞不同，它的作用也被认为保持不变。在海星卵母细胞的第一个减数分裂中，仅激活细胞周期蛋白B和Cdc2激酶，Cyclin A和Cdc2激酶的活性首次出现在第二个减数分裂的中期期间，并且在裂解阶段检测到这两种活性。细胞周期蛋白B和Cdc2激酶需要通过Cdc25对酪氨酸残基的二磷酸化进行激活，而细胞周期蛋白A和Cdc2激酶不会通过酪氨酸磷酸化来控制对活性的控制，并且在与Cyclin A的结合时，如果仅抑制CDC2 KIN和Cyclin a激活，则在与Cyclin A的结合时会立即激活。因此，在人卵的第一个切割阶段注入了抑制Cdc25活性的抗体的显微注射，并观察到细胞分裂的进展。实际上，抑制了细胞周期蛋白B和Cdc2激酶的激活，仅捕获细胞周期蛋白A和CDC2激酶的活性。目前，细胞分裂发生了大约20分钟的时间比平常晚20分钟。在分裂期间，细胞周期蛋白A和Cdc2激酶的活性增加以补偿细胞周期蛋白B和Cdc2激酶的缺乏，因此，如果所有CDC2激酶的活性达到一定水平，则可以认为分裂可以进展。我们目前正在进行详细的分析。