網膜神経節細胞の多様化と標的識別の分子・細胞機構

视网膜神经节细胞多样化和靶标识别的分子和细胞机制

基本信息

批准号：
08254222
负责人：
野田昌晴
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

網膜神経節細胞(RGC)の網膜内における二次元的、位置的(領域的)多様化が視中枢(視蓋)における投射の領域特異性に対応し、また、RGCの質的多様化が投射の層特異性に対応すると考えられている。我々はこの考え方を証明する分子・細胞的基盤を追求する研究を行った。1)RGCの位置的多様化我々は神経結合における領域特異性決定の分子機構を明らかにすることを目指して、ニワトリ網膜の前側あるいは後側の領域に特異的に発現する分子の単離を行ってきたが、この条件を満たす転写制御因子としてCBF-1,CBF-2を見い出していた。本研究ではこれらの分子をレトロウィルスベクターを用いて、ニワトリ網膜において異所的に強制発現させ、網膜視蓋投射における位置特異性に対する効果を見た。その結果、それぞれの分子を、本来発現しているのとは反対側の領域に発現させた場合、網膜のそれぞれの領域から伸長した軸索は、視蓋上で本来投射する領域と反対の領域に投射することが明らかになった。この結果は、転写調節因子の網膜における領域特異的な発現が、すなわち、CBF-1が網膜の鼻側領域、CBF-2が網膜の耳側領域の、RGCの視蓋への投射における位置特異性を決定していることを示唆している。2)RGCの質的多様化本研究では、RGCのサブセット及び視蓋の一部の層を選択的に染色するモノクローナル抗体の単離と、その抗原分子の同定を目指した研究を行った。得られた抗体の内、TB4は、網膜視蓋投射の過程でRGC軸索の標的である視蓋において選択的にF層を染色した。この抗原は視蓋F層に投射するRGCのサブセットで発現している。いくつかの証拠から、この層特異的染色はRGCから視蓋への本抗原の輸送によるものと結論づけられた。cDNAクローニングによってこの抗原分子を同定したところ、エズリンであることが判明した。エズリンは、細胞表面に存在する免疫グロブリンスーパーファミリー細胞接着分子アクチンを中心とする細胞骨格系を架橋している分子である。エズリンがRGCのサブセットに発現し、その神経終末がシナプス結合する中枢に局在することは、神経軸索が特異的標的と結合を形成する際に何らかの重要な機能を有することが推定される。

视网膜内视网膜神经节细胞（RGC）的二维和位置（区域）多样化对应于视觉中心（顶盖）投影的区域特异性，并且RGC的定性多样化对应于层特异性。的。我们进行了研究，以找到证明这一想法的分子和细胞基础。 1）RGC的位置多样化我们分离了在鸡视网膜前部或后部区域特异性表达的分子，目的是阐明决定神经连接区域特异性的分子机制。被发现是满足这种条件的转录调节因子。在这项研究中，我们使用逆转录病毒载体在鸡视网膜中强制异位表达这些分子，并检查它们对视网膜顶盖投影中位置特异性的影响。结果，当每个分子在与其最初表达的区域相对的区域中表达时，从视网膜的每个区域延伸的轴突将投射到与其最初投射的视顶盖上的区域相对的区域。明确预计这一结果表明，转录调节因子在视网膜中的区域特异性表达，CBF-1在视网膜鼻区，CBF-2在视网膜颞区，在RGC投射到视顶盖时具有位置特异性。这表明性别是决定的。 2) RGC 的定性多样化在本研究中，我们的目的是分离一种单克隆抗体，该抗体可以选择性地对 RGC 子集和视顶盖的某些层进行染色，并鉴定其抗原分子。在获得的抗体中，TB4选择性地对视顶盖中的F层进行染色，该层是视网膜顶盖投射过程中RGC轴突的目标。该抗原在投射到顶盖 F 层的 RGC 子集上表达。多项证据使我们得出结论，这种层特异性染色是由于该抗原从 RGC 转运到视顶盖所致。当通过cDNA克隆鉴定该抗原分子时，发现它是埃兹蛋白(ezrin)。 Ezrin 是一种桥接以肌动蛋白为中心的细胞骨架系统的分子，肌动蛋白是存在于细胞表面的免疫球蛋白超家族细胞粘附分子。埃兹蛋白在 RGC 的一个子集中表达并位于神经末梢建立突触连接的中心这一事实表明，当神经轴突与特定目标形成连接时，它具有一些重要的功能。