網膜視蓋投射における特異的神経結合形成の分子機構

视网膜顶盖投射中特定神经连接形成的分子机制

基本信息

批准号：
08271239
负责人：
野田昌晴
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)投射地図形成の特異性我々は領域特異的神経結合形成の分子機構を明らかにすることを目指して、ニワトリ網膜の前側(鼻側)あるいは後側(耳側)の領域に特異的に発現する分子の単離を行ってきた。得られたcDNA分子の構造解析の結果、転写制御因子CBF-1,CBF-2が網膜のそれぞれ鼻側、耳側の領域に特異的に発現することが明らかとなった。次にこれらの分子をレトロウィルスベクターを用いて、ニワトリ網膜において異所的に強制発現させ、網膜視蓋投射における領域特異性に与える効果を見た。その結果、それぞれの分子を、本来発現しているのとは反対側の領域に発現させた場合、網膜のそれぞれの領域から伸長した軸索は、視蓋上で本来投射する領域と反対の領域に投射することが明らかになった。この結果は、転写調節因子の網膜における領域特異的な発現が、すなわち、CBF-1が網膜の鼻側領域、CBF-2が網膜の耳側領域の、網膜神経の視蓋への投射における位置特異性を決定していることを示唆している。我々は両分子以外にも網膜で領域特異的に発現している数種の新規遺伝子を同定しており、今後はこれらの分子の構造と機能の解明を目指す。2)層特異的な結合本研究では、網膜神経節細胞(RGC)のサブセット及び視蓋の一部の層を選択的に染色するモノクローナル抗体の単離と、その抗原分子の同定を目指した研究を行った。得られた抗体の内、TB4は、網膜視蓋投射の過程でRGC軸索の標的である視蓋において選択的に7層を染色した。この抗原は視蓋7層に投射するRGCのサブセットで発現している。いくつかの証拠から、この層特異的染色はRGCから視蓋への本抗原の輸送によるものと結論づけられた。cDNAクローニングによってこの抗原分子を同定したところ、エズリンであることが判明した。エズリンは、ERMファミリーに属し、細胞表面に存在する免疫グロブリンスーパーファミリー細胞接着分子等と、アクチンを中心とする細胞骨格系を架橋している分子である。エズリンがRGCのサブセットに発現し、その神経終末がシナプス結合する中枢に局在することは、神経軸索が特異的標的と結合を形成する際に何らかの重要な機能を有すると推定される。

1）投影图的特异性我们一直在分离出在鸡视网膜的前（鼻）或后（鼻）或后（地球）区域中表达的分子，目的是阐明区域特异性神经结合形成的分子机制。对所获得的cDNA分子的结构分析表明，转录调节剂CBF-1和CBF-2分别在视网膜的鼻子和耳朵上分别表达。然后将这些分子定位强迫使用逆转录病毒载体在鸡肉视网膜中表达它们，并观察到它们对视网膜直肠直肠投影中区域特异性的影响。结果，揭示了当每个分子都在最初表达的区域相反的区域表达时，轴突已从视网膜项目的每个区域延伸到与最初投影在底座上的区域相反的区域。该结果表明，视网膜中转录调节剂的区域特异性表达，即CBF-1决定了视网膜神经对唇膜的投射在视网膜和CBF-2的鼻区域的位置特异性。除两个分子外，我们还确定了在视网膜中特异性表达的几个新基因，我们旨在阐明将来这些分子的结构和功能。 2）在这项研究中，我们进行了层次特异性结合，我们进行了研究，旨在分离单克隆抗体，这些抗体有选择地染色了视网膜神经节细胞（RGC）和一部分Tectum的一部分，并识别其抗原分子。在获得的抗体中，TB4选择性地染色了七层，这是视网膜底膜投影过程中RGC轴突的靶标。该抗原在投影到第七层的RGC的子集中表达。几个证据得出结论，该层特异性染色是由于抗原从RGC转移到底部的。通过cDNA克隆鉴定抗原分子，发现是ezrin。 Ezrin属于ERM家族，是一种分子，它可以交叉链接在细胞表面上存在的免疫球蛋白超家族细胞粘附分子，以及以肌动蛋白为中心的细胞骨架系统。 Ezrin在RGC的子集中的表达以及其神经末端在突触结合中心的定位是在与特定靶标形成结合方面具有重要功能。