巨核球分化の分子生物学的解析:多核化のメカニズムと細胞周期

巨核细胞分化的分子生物学分析：多核和细胞周期机制

基本信息

批准号：
07269213
负责人：
河北誠
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07269213/
关键词：
巨核球分化細胞周期巨核球系細胞株 GPIIb IIIa GATA-1 サイクリンA サイクリンB サイクリンD1

项目摘要

巨核球の多倍数体化の機序を解明するため,第一段階としてヒドロキシウレア(HU)による巨核球系細胞株CMKの同調培養系を確立し,以下の結果を得た.CMKはPMAの存在下で増殖が抑制され,巨核球の分化を強力に誘導するが,前以てHUでG1/S期に同調したCMKでは,培養開始時(0時間)にPMAを添加するとG2期(6-8時間後)に,13時間後(G1早期)に添加するとG1後期(添加後6-8時間)に一過性に細胞周期が停止した.この細胞周期の停止に一致して細胞周期調節因子として知られるサイクリンA,B,D1のdown regulationが認められた.いずれの場合も同時に巨核球の分化マーカーである血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa発現が強力に誘導されたことから,GPIIb/IIIa発現は,巨核球細胞周期の停止と密接に関連することが推測された.ノーザンブロット解析では,非刺激CMKに発現しているGATA-1が細胞周期に同調して変動し,S期とG1後期に発現が上昇した.S期早期(0時間)にPMAで刺激すると,刺激後6-10時間の時期にGATA-1発現が非刺激対照細胞に比し著明に亢進した.さらにG1早期(培養13時間後)に刺激すると,22-26時間の時期にGATA-1発現が亢進し,いずれの時期もGPIIb/IIIa発現が強力に誘導された.これらの結果から,細胞周期特異的なGATA-1発現は,GPIIb/IIIa発現すなわち巨核球分化に重要な役割を果たすことが示唆された.これらの実験と並行して,巨核球系分化因子の探索を続けていたが,最近,ヒト未分化甲状腺癌細胞株培養上清から,新規蛋白を純化し,遺伝子クローニングにもほぼ成功し,発表準備中である.

为了阐明巨核细胞多倍化的机制，作为第一步，我们使用羟基脲（HU）建立了巨核细胞系CMK的同步培养系统，并获得了以下结果：在CMK存在下，增殖被抑制并且强烈。诱导巨核细胞分化；因此，如果在培养开始时（0小时）添加PMA，它会在G2期（6-8小时后）短暂发生，如果在13小时后（G1早期）添加，则会短暂诱导在 G1 晚期（添加后 6-8 小时），细胞周期被抑制，细胞周期蛋白 A、B 和 D1（被称为细胞周期调节因子）下降。在这两种情况下，巨核细胞的分化标志物血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa的表达被强烈诱导，表明GPIIb/IIIa的表达与巨核细胞的细胞周期停滞密切相关。 Zanblot分析显示，未刺激的CMK中GATA-1的表达与细胞周期同步波动，在S期和G1晚期表达增加。在S期早期（0小时）用PMA刺激时，刺激后的GATA-1处理后6-10小时，与未刺激的对照细胞相比，表达显着增加。此外，当在 G1 早期（培养后 13 小时）刺激时，GATA-1 表达在 22 至 26 小时之间增强，并且 GPIIb/IIIa 表达在这两个时间都被强烈诱导。从这些结果来看，细胞周期特异性 GATA-1 表达由 GPIIb/IIIa 诱导。在这些实验的同时，我们继续寻找巨核细胞分化因子，最近我们发现人未分化甲状腺癌细胞系的培养上清液，由此我们纯化出了一种新的蛋白，成功克隆了该基因，目前正在准备发布。