ストレスに応答して活性化するキナーゼ群の解析

分析应激反应中激活的激酶

基本信息

批准号：
07253212
负责人：
後藤由季子
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07253212/
关键词：
ストレス刺激 JNK SAPK SEKI XMEK2 MEKK キナーゼカスケード

项目摘要

1)JNK/SAPKを活性化するキナーゼの候補として、MAPKKホモログのXMEK2(Xenopus由来)があったので、XMEK2を大腸菌に発現、精製し、JNK/SAPKを基質にするかを検討した。XMEK2は、JNK/SAPKを効率良くリン酸化し、活性化した。一方、XMEK2は、MAPKを全く基質にしなかった。2)MAPKKキナーゼのひとつMEKKが、XMEK2を活性化できることを見い出した。従って、少なくともin vitroでは、MEKK-XMEK2-JNK/SAPKというカスケードが動くことが示された。3)高張刺激した細胞の抽出液からJNK/SAPK活性化活性の精製を試みた。Q-sepharoseカラムにおいて、未吸着画分にほとんどの活性が溶出し、吸着画分に少量の活性が溶出した。ブロッティングの結果から、吸着画分の活性がSEK1に対応していることが明らかになった。従って、高張刺激によって活性化する、主なJNK/SAPK活性化因子は、未知のキナーゼであることが示唆された。現在このキナーゼを精製中である。4) JNK/SAPKの活性化がRasに依存しているか否かを、dominant negative Rasを用いて検討した。高張刺激、熱ショック、亜ヒ素酸(化学的ストレス)によるJNK/SAPKの活性化はRasに依存していなかったが、タンパク質合成阻害剤によるJNK/SAPKの活性化は、Rasに依存していた。5) UV刺激により、JNK/SAPKの一部が核移行することを見い出した。

1）作为激活JNK/SAPK的激酶的候选者，有XMEK2（源自Mapkk同源物的Xenopus），因此我们检查了Escherichia Coli中的XMEK2，并检查了JNK/SAPK是否是底物。 XMEK2已被有效地磷酸化和激活的JNK/SAPK。另一方面，XMEK2根本没有使MAPK成为基材。 2）MAPKK激酶MEKK之一发现XMEK2可以激活。因此，至少在体外表明称为Mekk-XMek2-JNK/SAPK的级联动作。 3）我们试图从高刺激的细胞提取物中纯化JNK/SAPK激活活性。在Q-Sepharse列中，大多数活动都在前所未有的图像中洗脱，并且在吸附绘画中洗脱了少量活性。印迹的结果表明，吸附绘画的活性对应于SEK1。因此，有人提出，由高刺激激活的主要JNK/SAPK激活因子是一种未知的激酶。该激酶目前正在净化。 4）我们检查了JNK/SAPK激活是否取决于使用显性负RAS的RAS。由于高刺激性，热休克和亚毒素（化学应力）引起的JNK/SAPK的激活不取决于RA，而是用蛋白质合成抑制剂激活JNK/SAPK，取决于RAS。 5）紫外线刺激发现某些JNK/SAPK SHIPT核转变。