発生工学を基礎とした細胞分化機構の研究

基于发育工程的细胞分化机制研究

基本信息

批准号：
06268216
负责人：
鍋島陽一
金额：
$ 1.92万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06268216/
关键词：
標的組み換え MyoD family 筋分化 myogenin loxP Cre-リコンビネース

项目摘要

標的遺伝子組み換えによる遺伝子のノックアウト、外来遺伝子の導入によるトランスジェニックマウスの作成を行い、下記に列記すうような成果を既ににあげており、その技術の確立と普及に努めてきた。さらに基礎となるリコンビネース遺伝子とその認識配列の構築、培養細胞を用いた予備実験、対象遺伝子の分離とターゲッティングベクターの構築を行っている。1)筋分化制御因子myogenin遺伝子の標的組み換えによるノックアウトとその変異表現型の解析を行い、Myogeninが筋細胞分化を制御していることを証明した。また、ノックアウトマウスより調製した初代筋芽細胞の性質の解析、ノックアウトマウス個体における筋分化制御遺伝子の発現を解析することにより筋細胞系譜の細胞には幾つかのポピュレーションが存在し、特にMyogeninが欠失していてもMRF4が発現することにより筋管細胞へと分化することをしめした。2)Na^+/H^+アンチポーター遺伝子を強く発現するトランスジェニックマウスを作成し、このマウスが食塩負荷により高血圧となることを証明した。3)loxP配列を両端にもつNeo-TKカセット、核移行シグナルをN端にもつリコンビネースを発現するベクターを作成した。また、リコンビネースを筋特異的にあるいは神経細胞特異的に発現するプロモーターの下流につなぎ、発現ベクターを作成し、トランスジェニックマウスを作成している。

我们通过靶向基因重组敲除基因并引入外源基因培育出转基因小鼠，已经取得了以下成果，并一直致力于这些技术的建立和推广。此外，我们正在构建基本重组基因及其识别序列，利用培养细胞进行初步实验，分离目标基因，构建靶向载体。 1）我们通过靶向重组并分析其突变表型，证明肌细胞生成素通过敲除肌肉分化调节因子肌细胞生成素基因来控制肌肉细胞分化。此外，对从基因敲除小鼠制备的原代成肌细胞的特性和基因敲除小鼠中肌肉分化控制基因的表达的分析表明，肌细胞谱系中存在多个细胞群，并且肌细胞生成素尤其重要，即使当MRF4存在时。被删除后，它通过表达 MRF4 分化为肌管细胞。 2）我们创建了强烈表达Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的转基因小鼠，并证明这些小鼠由于盐负荷而出现高血压。 3) 创建了表达两端具有loxP序列的Neo-TK盒和N端具有核定位信号的重组酶的载体。此外，我们正在通过将重组酶连接到表达肌肉特异性或神经元特异性表达的启动子下游来创建转基因小鼠，从而创建表达载体。