β蛋白の精製とその分子種のマススペクトロメトリーによる解析

β蛋白的纯化及其分子种类的质谱分析

• 批准号: 06254201
• 负责人: 玉岡 晃
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06254201/
• 关键词: β蛋白; アルツハイマー病; 家族性アルツハイマー病; β蛋白前駆体; アミロイド; マススペクトロメトリー; ELISA

β淡白1-40とβ蛋白1-42/43を識別する断端特異的な抗体を用いたELISAやマススペクトロメトリーにより、孤発性のアルツハイマー病(AD)やβ蛋白前駆体(APP)717のValがIleに変異した家族性アルツハイマー病(familial Alzheimer's disease;FAD)脳のβ蛋白分子種の解析を行なった。FAD脳と孤発性のAD脳とでは、β蛋白の分子種は基本的には同様であったが、FAD脳ではC末端の長いβ蛋白1-42/43の割合が増加していた。このことは、同様なAPPの変異を発現させた培養細胞の上清中のβ蛋白においても確認できた。β蛋白1-42/43はβ蛋白1-40より重合しやすいことより、このことがFADの発症機序に関与している可能性がある。即ち、APP717の変異(Val-Ile)はβ蛋白のC末端のprocessingに影響を及ぼすことによってFADを発症するものと推測できる。孤発性のAD脳においてβ蛋白1-42/43の割合は多様であったが、β蛋白の総量の少ないものではβ蛋白1-42/43の割合が高く、多くなればなるほど、β蛋白1-40の割合が高くなる傾向が認められた。この事実も、β蛋白1-42/43がアミロイド線維形成時の核となり、β蛋白1-40がその周囲に重合し、アミロイド線維が増生していく、という"nucleation-dependent mechanism of the β amyloid deposition"を支持している。一方、び慢性老人斑に富み、脳血管アミロイドを含まないAD小脳より、β蛋白を抽出し、それを上記のELISAにてβ蛋白の分子種を解析した。その結果、び慢性老人斑は主としてβ蛋白1-42/43より構成されることが明らかとなった。

我们分析了家族性阿尔茨海默氏病（FAD）大脑中的β蛋白分子物质，其中零星阿尔茨海默氏病（AD）和β蛋白前体的Val（APP）717（APP）717通过ELISA和质谱区分发了使用Stump-tump-natibeiss抗体β- 1-42/43。 β蛋白的分子种类在FAD脑和零星的AD脑中基本相同，但是在FAD脑中，C-末端1-42/43的β蛋白1-42/43的比例增加。在表达相似应用突变的培养细胞的上清液中，在β蛋白中证实了这一点。 β蛋白1-42/43比β蛋白1-40更可能参与FAD发育机理。也就是说，可以估计，App717突变（Val-Eile）通过影响β蛋白的C末端加工而发展。 β蛋白1-42/43的比例在零星的AD大脑中是多种多样的，但是总β蛋白的β蛋白的比例较高，β蛋白的比例越高，β蛋白的比例越高，β蛋白1-40的比例越高。这一事实还支持β淀粉样蛋白沉积的“成核依赖性机制”，其中β蛋白1-42/43在淀粉样蛋白原纤维形成过程中变成核，而β蛋白1-40围绕其围绕它进行聚合，从而增加淀粉样纤维纤维。另一方面，β蛋白是从富含慢性老年斑块的AD小脑中提取的，不含脑血管淀粉样蛋白，并使用上述ELISA分析了β蛋白的分子种类。结果，据透露，二分的老年斑块主要由β蛋白1-42/43组成。

项目成果

A.Tamaoka: "APP 717 missense mutation effects the vatic at amyloid protein specie 5(Aβ1-42/43 and Aβ1-40) in familial Alzheimer's disease brain." J.Biol.Chem.269. 32721-32724 (1994)

A.Tamaoka：“APP 717 错义突变影响家族性阿尔茨海默病大脑中淀粉样蛋白 5（Aβ1-42/43 和 Aβ1-40）的 Vatic。”J.Biol.Chem.269（1994）。

玉岡 晃: "アルツハイマー病の分子遺伝学" 臨床医. (発売予定).

Akira Tamaoka：“阿尔茨海默病的分子遗传学”临床医生（预定发布）。

玉岡 晃: "家族性Alzheimer病" 臨床医. 19. 476-479 (1993)

Akira Tamaoka：“家族性阿尔茨海默病”临床医生。19. 476-479 (1993)

A.Tamaoka: "Biochemical evidence for the long-tail form (Aβ1-42/43) of amyloid β plotein as a seed molecule in cevebral deposits of Alzheimer's disease" Biochem.Biophys.Res.Commun.205. 834-842 (1994)

A.Tamaoka：“淀粉样β蛋白的长尾形式（Aβ1-42/43）作为阿尔茨海默病大脑沉积物中种子分子的生化证据”Biochem.Biophys.Res.Commun.205（1994） ）

玉岡 晃: "ミオクローヌスてんかん 最近の進歩" 宮武正(科学評論社), 186 (1994)

Akira Tamaoka：“肌阵挛性癫痫的最新进展” Tadashi Miyatake (Kagaku Hyoronsha)，186 (1994)