酸化ストレスによるBACE1発現変化とアミロイドβ蛋白との相関に関する解析

氧化应激引起的BACE1表达变化与β淀粉样蛋白的相关性分析

• 批准号: 18023008
• 负责人: 玉岡 晃
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18023008/
• 关键词: 老化; ストレス; 痴呆; 脳神経疾患; 内科

[目的]培養細胞に酸化ストレスを加えることによりBACE1の発現変化の機序を検討した。[方法]BACE1を過剰発現させたSH-SY5Y細胞(BA3細胞)に酸化ストレス物質であるEthacrynic acid(EA)や4-hydroxynonenal(HNE)を負荷し、抗BACE1抗体を用いたWestern blotで検討した。BA3細胞にEA負荷を行った後、蔗糖密度勾配法により分画し,各分画のWestern blot解析を行った。分画前の試料と,脂質ラフト画分やそれ以外の画分をそれぞれ対照とEA負荷とで比較検討した。BACE1のリン酸化が起こらない変異であるS498A変異のBACE1を過剰発現させたSH-SY5Y細胞(SH-BACE1-SA細胞)でも蔗糖密度勾配法を用いて同様な検討を行った。初代培養神経細胞やSH-SY5Y細胞をそれぞれ蔗糖密度勾配法で分画し、内在性BACE1の分布も検討した。[結果および考察]BA3細胞における酸化ストレス負荷では、APP,calnexinレベルの軽度増加傾向.HO-1レベルの増加が認められた。また、EA20mM,HNE5mMでは細胞死はほとんど認められないが,EA30mMでは少数の細胞死が認められた。BA3細胞のEA20mM負荷時に脂質ラフト分画やそれ以外の分画でHO-1レベルの上昇がみられた。BACE1レベルは脂質ラフト分画で軽度増加傾向がみられた。BA3細胞とSH-BACE1-SA細胞にとおけるBACE1の分布では、BACE1の分布パターンに著変は認められなかった。初代培養神経細胞とSH-SY5Y細胞におけるBACE1の検討では、内因性BACE1の脂質ラフト局在が確認された。SH-SY5Y細胞では脂質ラフトにmatureBACE1が多く,非ラフトではimmatureBACE1が多かった。[結論]BACE1過剰発現SH-SY5Y細胞において,弱い酸化ストレス負荷によりBACE1全体量は変化しないが,脂質ラフトではBACE1レベルが増加する傾向が認められた。S498A変異BACE1も野生型BACE1と同様の脂質ラフト局在を示した。

[目的]通过将氧化应激施加到培养的细胞中，可以检查VACE1变化的机理。 [方法]将氧化应激物质（EA）和4-羟基烯酮（HNE）加载到过度表达的Bace1的SH-SY5Y细胞（BA3细胞）上，并检查了抗Bace1抗体。在BA3细胞上负载EA后，通过糖密度梯度对每个分裂的每个部分进行了蛋白质印迹分析。分裂前的样品，分别将脂质延伸绘画和其他绘画与对比度和EA负载进行了比较。使用相同的糖密度梯度方法对SH-SY5Y细胞（SH-VACE1-SA细胞）过度表达的S498A突变的BACE1（不会引起BACE1的磷酸化）。第一代培养神经细胞和SH-SY5Y细胞分别分为糖密度梯度，还检查了内部BACE1的分布。 [结果和考虑]在BA3细胞的氧化应激载荷中，APP，钙钙蛋白水平的水平轻度升高。HO-1水平。此外，在EA20mm和HNE5MM中很少发现细胞死亡，但在EA30mm中发现了少量的细胞死亡。在BA3电池的EA20mm载荷时，脂质延伸分区和其他划分增加了HO-1水平。 BACE1水平通过脂质延伸而有轻度提高。在SH-VACE1-SA细胞上BA3细胞和BACE1的分布中，不允许BACE1分布模式。在初始培养神经细胞和SH-SY5Y细胞中Bace1的研究中，确认了内源性BACE1的脂质筏。在SH-SY5Y细胞中，脂质筏中有许多成熟的bace1，而在非生育中，不成熟的Bace1很大。 [结论] BACE1过多的SH-SY5Y细胞并没有改变由于氧化应激负荷而引起的BACE1的总量，但是脂质筏倾向于增加BACE1水平。 S498A怪异的Bace1还显示了与野生型Bace1相同的脂质筏位置。

项目成果

Fibrillogenic muclei composed of P301L mutant tau induce elongation of P301L tau, but not wild-type tau.

由 P301L 突变型 tau 蛋白组成的纤维化细胞核会诱导 P301L tau 蛋白的延长，但不会诱导野生型 tau 蛋白的延长。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J Biol Chem 282
• 作者: Aoyagi;H.;Hasegawa;M.;Tamaoka;A.
• 通讯作者: A.

認知症の分子病態の多様性

痴呆分子病理学的多样性

• 发表时间: 2006
• 期刊: 最新医学 61・12
• 作者: 森雅裕;桑原聡;早川省;金坂俊秀;服部孝道;玉岡 晃
• 通讯作者: 玉岡 晃

Beta-site APP cleaving enzyme 1 (BACE1) is increased in remaining neurons in Alzheimer's disease brains

• DOI: 10.1016/j.neures.2005.10.001
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: NEUROSCIENCE RESEARCH
• 影响因子: 2.9
• 作者: Harada, H;Tamaoka, A;Murayama, S
• 通讯作者: Murayama, S

Upward gaze-nystagmus with organoarsenic poisoning

有机砷中毒引起的向上凝视眼震

• 发表时间: 2006
• 期刊: Neurology 66・1
• 作者: Kuwabara S;Misawa S;Mori M,Tamura N;Kubota M;Hattori T;Nakamagoe K
• 通讯作者: Nakamagoe K

Beta-synemin expression in cardiotoxin-injected rat skeletal muscle.

注射心脏毒素的大鼠骨骼肌中β-synemin 的表达。

• 发表时间: 2007
• 期刊: BMC Musculoskelet Disord 8
• 作者: Mizuno Y;Guyon JR;Ishii A;Hoshino S;Ohkoshi N;Tamaoka A;Okamoto K;Kunkel LM.
• 通讯作者: Kunkel LM.